2013届高三生物复习课件--第2讲微生物的培养与应用分析.ppt

1;第 2 讲　微生物的培养与应用;1．培养基类型 ;用 途;【特别提醒】 ①加入培养基中的凝固剂(如琼脂)，一般不能被微生物利用，只起到凝固作用。 ②选择培养基一般只生长具有特定目的的微生物，鉴别培养基可以存在其他微生物，而且能鉴别特定的微生物。 ;2．配制牛肉膏蛋白胨固体培养基的步骤及注意事项 (1)步骤：计算→称量→溶化→灭菌→倒平板 (2)注意事项：①倒平板的温度一般在50℃左右适宜，温度过高会烫手，过低培养基又会凝固。②平板需倒置，这样既可使培养基表面的水分更好地挥发，又可防止皿盖上的水珠落入培养基，造成污染。 ;3．纯化大肠杆菌的操作过程及注意事项 (1)原理：在培养基上将细菌稀释或分散成单个细胞，使其长成单个的菌落，这个菌落就是一个纯化的细菌菌落。 (2)方法：平板划线法、稀释涂布平板法。 ①平板划线法：平板划线法中细胞的分离和稀释过程发生在接种环在固体平板表面上的移动划线过程中。在线的开始部分，微生物往往连在一起生长，随着线的延伸，菌数逐渐减少，最后可能形成纯种的单个菌落。(如下图) ;几种划线方法示意图 注意　①第一次划线及每次划线之前都需要灼烧接种环灭菌。②灼烧接种环之后，要冷却后才能伸入菌液，以免温度太高杀死菌种。③划线时最后一区域不要与第一区域相连。④划线用力大小要适当，防止用力过大将培养基划破。 ②稀释涂布平板法;Ⅰ.系列稀释操作(图1) A．将分别盛有9 mL水的6支试管灭菌，并按101～106的顺序编号。 B．用移液管吸取1 mL培养的菌液，注入101倍稀释的试管中。用手指轻压移液管上的橡皮头，吹吸3次，使菌液与水充分混匀。 C．从101倍稀释的试管中吸取1 mL稀释液，注入102倍稀释的试管中，重复b步混匀操作。以此类推，直到完成最后1支试管的稀释。 ;注意　移液管需要经过灭菌。操作时，试管口和移液管应在离火焰1～2 cm处。 ;Ⅱ.涂布平板操作如图2所示 ;注意　稀释涂布平板操作复杂，各个细节均应保证“无菌”。具体如下：①酒精灯与培养皿的距离要合适；②吸管头不要接触任何其他物体；③吸管要在酒精灯火焰周围使用。 ;【对位训练】 1．有关培养基配制原则的表述正确的是 A．任何培养基都必须含有碳源、氮源、矿质元素、水 B．碳源和氮源必须具有一定比例，碳元素的含量最多，其次为氮元素 C．微生物的生长除受营养因素影响外，还受到pH、氧、渗透压的影响 D．营养物质的浓度越高越好 答案　C;2．(2012·合肥二模)用平板划线法或稀释涂布平板法纯化大肠杆菌时 ①可以用相同的培养基　②都需要使用接种针进行接种　③都需要在火焰旁进行接种　④都可以用来计数活菌 A．①②　　　　　　　B．③④ C．①③ D．②④ ;解析　平板划线法或稀释涂布平板法都使用固体培养基，故①正确；平板划线法采用接种针进行操作，而稀释涂布平板法采用涂布器进行操作，故②错误；纯化时，要进行无菌操作，需要在火焰旁接种，避免空气中的微生物混入培养基，故③正确；平板划线法一般用于分离而不是计数，故④错误。 答案　C;1．筛选原理 配制选择培养基，把尿素作为培养基中的惟一氮源，原则上只有能够利用尿素的微生物才能够生长，其他微生物则不能在此培养基上生长。 ;2．统计菌落数目 (1)理论依据：当样品的稀释度足够高时，培养基表面生长的一个菌落，来源于样品稀释液中的一个活菌。通过统计平板上的菌落数，就能推测出样品中大约含有多少活菌。为了保证结果准确，一般选择菌落数在30～300的平板进行计数。 (2)计算方法；每克样品中的菌株数＝(C÷V)×M 其中C代表某一稀释度下平板上生长的平均菌落数：V代表涂布平板时所用稀释液的体积(mL)；M代表稀释倍数。 ;【对位训练】 3．下列关于微生物分离和培养的有关叙述，错误的是 A．微生物培养前，需对培养基进行消毒 B．测定土壤样品中的细菌数目，常用菌落计数法 C．分离土壤中不同的微生物，要采用不同的稀释度 D．分离能分解尿素的细菌，要以尿素作为培养基中唯一的氮源 解析　微生物培养前，需对培养基进行灭菌处理。 答案　A ;4．(2012·北京海淀期中)通过实验测定土壤中的细菌数量，下列与此操作有关的叙述中，不正确的是 A．用蒸馏水配制牛肉膏蛋白胨培养基，经高温、高压灭菌后倒平板 B．取104、105、106倍的土壤稀释液0.1 mL，分别涂布于各组平板上 C．将培养皿倒置，37 ℃恒温培养24～48小时 D．选择菌落数在300个以上的培养皿进行计数 ;解析　检测土壤中细菌总数，用蒸馏水配制牛肉膏蛋白胨培养基，经高温、高压灭菌后倒平板；取104、105、106倍的土壤稀释液和无菌水各0.1 mL，分别涂布于各组平板上；将实验组和对照组平板倒置，37℃恒温培养24～48