纳米转运系统介导的hTERTsiRNA和Bmi1siRNA对MCF7细胞增殖及凋亡的影响.pdfVIP

万方数据 摘要纳米转运系统介导的???畇??和???．???????细胞增殖及凋亡的影响背景和目的硕士研究生：导师：张敏李惠翔教授吕新全教授郑州大学基础医学院病理学教研室河南省肿瘤病理重点实验室河南郑州???乳腺癌是我国女性常见的恶性肿瘤，近年来发病率呈大幅度上升，在很多城市已占据女性恶性肿瘤的首位或第二位，并且年轻化趋势日趋明显。目前临床治疗乳腺癌仍面临着常规治疗失败以及肿瘤复发的难题。??．?基因作为????家族成员之一，在细胞周期调控，细胞永生化和细胞衰老中起着重要的作用。近年来，大量的研究表明，???参与调节肿瘤细胞以及干细胞的自我更新和分化，在多种人类肿瘤，包括肺癌、卵巢癌、急性髓细胞性白血病、鼻咽癌、乳腺癌、神经母细胞瘤中高表达，这表明中???可能在癌症的发生和发展中发挥重要的作用。端粒酶??????是使端粒延伸的反转录??铣擅福?肆Ｃ改芤宰陨???D０搴铣上赴?至咽彼?JУ腄?，维持细胞端粒长度的稳定。端粒酶活性主要在转录水平上进行调节，因此人体端粒酶逆转录酶??????????琱???晌6肆Ｃ富钚缘鹘诘囊桓鱿匏僖蛩兀?攵肆Ｃ傅?表达呈一致性。在人的正常体细胞中，端粒酶的活性受到严格的调控，只有在造血细胞、干细胞和生殖细胞等这些不断分裂的细胞之中，才可以检测到具有??????．?????????????????? 万方数据 材料和方法中处于过度活化的状态，并己成为一种被广泛接受的抗肿瘤疗法的靶基因。综合国内外研究现状，目前，运用???扇沤?谢?蛑瘟瓶赡苁俏蠢慈橄侔┳酆?治疗中最有希望的有效手段之一。为解决小干扰??H拘?实汀⒁妆幌赴??核酸酶降解的难题，国内外学者也做了许多大胆的尝试与研究。目前．一种新型??，??受到广泛的关注。纳米微粒载体是近年来用于肽类、蛋白质、寡核廉价、可生物降解、稳定等其它基因载体不具备的优势，有望成为基因转运和多聚阳离子载体。???蟹岣坏难衾胱拥绾桑?伤鹾虾怂岢赡擅状笮〉目帕Ｗ?制成???菇ǖ腖?的结构类似于病毒，含有一个带有遗传物质的核和一个脂质外壳。可有效地保护核酸和阳离子聚合物组成的内核免受核酸酶的直接作用，脂质体转染???赴?秆「扇臖??及????虻淖罴裇??片段及最佳浓度活性的端粒酶。端粒酶，特别是其催化亚基????颍?诖笤????サ闹琢?的载体：脂质体．多聚阳离子．核酸复合物纳米微粒载体???．?????．????苷酸和治疗基因等生物大分子的新的转运系统。具有高效、无免疫原性、安全、基因治疗中应用潜力巨大的非病毒载体。多聚阳离子载体可缩合核酸分子形成纳米微粒，其中聚乙烯亚胺?????????琍??墙?昀囱芯孔钗9惴旱?物，有利于治疗性基因进入细胞内。脂质体用来包裹??疍????顾跆?脂质层可促进??胂赴?さ娜诤希?⑼ü?赴?哪谕袒蛲淌勺饔媒????哪?的基因导入细胞中。进一步提高了转染效率。本实验将从细胞学层面进一步验证纳米转运系统介导的???聊珺?。??????蚨匀橄侔┫赴鸐?．?鲋秤氲蛲黾癇?．?雋??表达的影响。运用纳米转运系统介导的???．???軳???畇??转染乳腺癌???细胞，采用??????和????．??觳飧髯槿橄侔㎝?．?赴?蠦?．?雋??的蛋白及??的表达水平；采用???觳飧髯橄赴?鲋城榭觯辉擞昧魇较赴?术检测各组细胞凋亡情况。目的：探讨纳米转运系统介导的???聊珺?．??????蛞种迫橄侔┫赴鸐?．?鲋场⒂盏计涞蛲龅於ɡ砺刍?　?人乳腺癌???细胞在???、?。?嘌?渲信嘌??谥?侍宓慕榈枷伦?染人乳腺癌???细胞，筛选出最佳转染浓度以及运用????．??际跎秆〕?摘要? 万方数据 票窵?纳米微粒载体并运用???觳馄涠韵赴?拘??擅鬃T讼低辰榈嫉腟??沉默???雋??基因抑制乳腺癌细胞???鲋场⒂盏计涞蛲??臣蒲Т??拿口术默???和???最佳???扇牌?巍??制备??擅孜⒘Ｔ靥濉??原子力显微镜检测??擅孜⒘Ｔ靥逍翁???凝胶阻滞实验检测??擅孜⒘Ｔ靥宓目姑盖心芰σ约爸?侍灏?狻??共聚焦显微镜检测细胞对??擅孜⒘５纳闳搿?????觳馄涠韵赴?拘浴??取人乳腺癌???细胞分为七组：空白对照组、??椤??．???组??、?????组??、?????H咀????????????染组??、??????????转染组??。运用?????技术检测各组细胞中???和???牡鞍妆泶铩??使用上述分组采用????．??际跫觳飧髯橄赴?蠦?．???和??的表达。?使用上述分组采用???觳飧髯橄赴??ひ种坡省??使用上述分组运用流式细胞术检测各组细胞凋亡的变化情况。使用???．??型臣品治觯?煅樗?糰?．?。??．??际跎秆??．????蚳?????最佳特异性片段。在??表达水平上，??????