5 分子生物学研究方法(上).ppt

？现代分子生物学的快速发展;核酸操作技术主要包括：核酸凝胶电泳、核酸的提取与纯化、 PCR扩增、突变位点的检测、 DNA分子的切割与连接、细胞转化、核酸序列分析、核酸分子杂交以及基因的人工合成、定点突变等。;第五章： 分子生物学研究方法（上）;2 主要核酸操作技术;--前言;2.1 核酸分离;一、核酸分离原则;2.1 核酸分离;（二）防止核酸的生物降解 细胞内或外来的各种核酸酶能消化核酸链中的磷酸二酯键，破坏核酸一级结构。所用器械和一些试剂需高温灭菌，提取缓冲液中需加核酸酶抑制剂。 1 DNA酶抑制剂 金属离子螯合剂：DNA酶需要金属二价离子Mg2+、Ca2+的激活，使用其螯合剂可抑制DNA酶活性。如EDTA-Na2； 阴离子型表面活性剂：如SDS对核酸酶有抑制作用，还能使蛋白质变性，并与变性蛋白结合成带负电荷的复合物，该复合物高盐溶液中沉淀。;（二）防止核酸的生物降解 2、RNA酶（RNAase) RNAase分布广泛，极易污染样品，且耐高温、耐酸、耐碱，不宜失活。 DEPC(二乙基焦碳酸盐) (C2H5OCOOCOOC2H5) 粘性液体，很强的核酸酶抑制剂。 作用机制：与蛋白质中His结合使蛋白变性。 使用注意：剧毒；DEPC也能破坏单链核酸中大部分腺嘌呤环。但浓度比使蛋白质变性的浓度大100～1000倍；容易降解