中药化学-6.黄酮-3.29.pptVIP

分离黄酮类化合物常用硅胶、聚酰胺、葡聚糖凝胶、氧化铝等填料。; 一般为吸附色谱，可以用于分离极性较小的异黄酮、二氢黄酮和高度甲基化的黄酮。 加水去活化后，为分配色谱，可用于分离极性较大的多羟基黄酮及其苷类。 ;① 若母核结构相同，而-OH取代数目不同，则-OH多的后出柱； ② 易形成分子内氢键的-OH，其极性变小先出柱； 如：邻二-OH 间二-OH （Rf值） ③ 一般出柱顺序：苷元 单糖苷 双糖苷 多糖苷。;（2）聚酰胺柱色谱; 聚酰胺分子中具有酰胺羰基，可与酚羟基形成氢键，主要依据与被分离物质成氢键能力不同进行分离。;① 形成氢键的基团越多，则吸附力越强；;聚酰胺“双重色谱”原理;正相与反相色谱;水→甲醇或乙醇→丙酮→稀氢氧化钠水溶液或氨水→甲酰胺→二甲基甲酰胺→尿素水溶液;聚酰胺TLC Rf值： 聚酰胺柱色谱洗脱顺序：; 氧化铝对黄酮类化合物吸附力强，特别是具有3-OH或5-OH 、4-羰基及邻二酚羟基黄酮类化合物与铝离子络合而被牢固吸附在氧化铝柱上，难于洗脱，所以很少应用。 通常情况下，要求在分子的结构中无酸性基团，或Ar-OH被甲基化，往往也可以用氧化铝柱分离。;原理: a 分离游离黄酮时，主要靠吸附作用。 凝胶对黄酮类化合物的吸附程度取决于游离酚羟基的数目。 b 分离苷时，则分子筛的属性起主导作用。 在洗脱时，黄酮甙类大体上是按分子量由大到小的顺序流出柱体。; Ve/Vo越小，化合物越容易洗脱。 从表中可以看出，首先洗脱下来的是苷类成分，按照分子筛原理分离，然后是游离黄酮类成分，按照吸附原理分离。 ;比较它们酸性的强弱;比较它们酸性的强弱;酸性 极性; 用硅胶柱色谱分离下列一组化合物，用CHCl3-MeOH进行洗脱，这四个化合物流出顺序为; 以聚酰胺柱色谱分离下列化合物，以浓度递增的乙醇液洗脱时的洗脱先后顺序： ;B; 用硅胶柱层析，以不同浓度的氯仿-甲醇进行梯度洗脱，流出柱外的顺序是 ( )( )( )( ). 用聚酰胺柱层析，以不同浓度的乙醇-水进行梯度洗脱，流出柱外的顺序是 ( )( )( )( ). ;在硅胶柱色谱上的出柱顺序为 （ ）（ ）（ ） 在聚酰胺柱色谱上的出柱顺序为 （ ）（ ）（ ） 在葡聚糖凝胶柱色谱上的出柱顺序为 （ ）（ ）（ ）;第5节?? 黄酮类化合物的检识;3.旋光性 游离的各种苷元母核中，除二氢黄酮、二氢黄酮醇、黄烷及黄烷醇有族光性外，其余则无光学活性。苷类由于在结构中引入糖的分子，故均有旋光性，且多为左旋。 4.溶解度 黄酮类化合物的溶解度因结构及存在状态（苷和苷元、单糖苷、双糖苷或三糖苷）不同而有很大差异。 ;母核检识： 盐酸-镁粉反应 黄酮、黄酮醇、二氢黄酮、二氢黄酮醇 四氢硼钠反应 二氢黄酮（醇）类 五氯化锑反应 查耳酮类 取代基团检识： 锆盐-枸橼酸反应 3-OH、 5-OH黄酮鉴别 氨性氯化锶反应 邻二酚羟基; 纸色谱适合分离检识各种类型黄酮类化合物，包括苷和苷元。双向纸色谱能检识植物粗提物中黄酮类化合物存在的最好方法之一。 原理：分配原理 适用范围：游离黄酮（苷元）及黄酮苷的分离鉴别 ;展开剂： 苷类成分可采用双向展开： 第一相展开采用醇性溶剂， 如BAW系统（正丁醇：醋酸：水，4：1：5上层）； 第二相展开用水性溶剂， 如氯仿：醋酸：水（3：6：1）。 苷元则多采用醇性溶剂。 花色苷及其苷元，可用含盐酸或醋酸的溶剂。 显色剂： 2%AlCl3甲醇液（紫外光下检测）； 1%FeCl3 / 1%K3Fe(CN)6(1:1)混合液。;双向PC;苷元的反相色谱行为: 平面型分子水溶性 非平面型分子 平面型分子: 黄酮(醇)、查耳酮的Rf小, 几乎留在 原点不动(Rf 0.02);非平面型分子: 二氢黄酮(醇)、二氢查耳酮的Rf大,  因亲水性较强(Rf 0.10-0.30)。;第一相展开采用醇性展开剂 如: BAW n-BuOH: HOAc:H2O=4:1:5上层 TBA t-BuOH: HOAc: H2O=3:1:1 水饱和n-BuOH 层析行为: Rf值: 苷元单糖苷双糖苷 一般:苷元在