2--淋巴细胞分离技术及玫瑰花环试验.pptVIP

（一）淋巴细胞分离技术（二）E玫瑰花环试验;一、实验原理;;（二）E玫瑰花环试验;;erythrocyte antibody rosette formation test; 了解血液中的各种细胞成分及特性。 　掌握实验动物外周血中淋巴细胞的分离方法 　掌握T、B淋巴细胞的区分方法及T淋巴细胞的计数方法。 ;1. 兔淋巴细胞分离液、 1%绵羊红细胞、 生理盐水、 pH6.4的PBS液、 Hank,s液、瑞氏染色液（I液）、吉姆萨染色液（II液）、香柏油、二甲苯、 甲醇、碘酊棉球、75%酒精棉球。 2. 50mL注射器，10ml玻璃离心管、50ml离心管、擦镜纸、移液枪（枪头）、载玻片、巴氏吸管、镊子等。 3. 显微镜、离心机、 　;取柠檬酸三钠抗凝兔血3ml于离心管中,从中吸取4ul用于制作全血涂片①。;剩下的抗凝血分别沿离心管壁轻轻地加入到3ml的淋巴细胞分离液的上面，使二层液体的界面不相混合。 ;用5倍体积Hank,s液反复洗涤淋巴细胞层2??，每次均2000r/min离心10min，沉淀物即为淋巴细胞。 　注：若第一次离心后，沉淀的淋巴细胞中有少量红细胞，可加蒸馏水1ml左右，振摇1min，使红细胞破裂，然后立即加磷酸缓冲液4ml左右，混2000r/min离心10min，弃上清液，继续用磷酸缓冲液洗涤一次，沉淀的即为淋巴细胞。 ;取5～10ul淋巴细胞用于涂片镜检②。 余