锌离子影响朊蛋白错误折叠机制课题.doc

分类号 密级 UDC 编号 武 汉 大 学 博 士 学 位 论 文 锌离子影响朊蛋白错误折叠 机制研究  eq \o\ad(研究生姓名,　　　　　　　　　)：潘锴 指导教师姓名、职称：梁毅 教授、博导  eq \o\ad(学科、专业名称,　　　　　　　　　)：生物学 生物化学与分子生物学  eq \o\ad(研究方向,　　　　　　　　　)：结构生物学 二〇一五年九月 Classified number: Secret grade: UDC: Thesis number: Wuhan University Doctor of Philosophy Thesis Mechanisms for Zinc Modification on Prion Protein Misfolding Student name: Pan Kai Name and Title of Adviser: Prof. Liang Yi Faculty and Specialty: Biology, Biochemistry and Molecular biology Research Area: Structural biology September, 2015 郑重声明 本人的学位论文是在导师指导下独立撰写并完成的，学位论文没有剽窃、抄袭、造假等违反学术道德、学术规范和侵权行为，否则，本人愿意承担由此而产生的法律责任和法律后果，特此郑重声明。 学位论文作者（签名）： 年月日   论文创新点 本文系统研究了锌离子影响朊蛋白聚集的分子机制，发现锌离子可以改变朊蛋白的聚集途径和聚集体的结构，野生型朊蛋白的聚集途径分为典型的四个阶段：无定形聚集体、原纤维、成熟纤维和片段化的纤维；加入100 ?M锌离子后野生型朊蛋白则快速形成不溶于Sarcosyl的寡聚体，然后形成短棒状的聚集体。然而与野生型朊蛋白不同的是，八肽重复序列缺失的朊蛋白在加或不加锌离子的情况下都可以形成典型的纤维。因此锌离子改变朊蛋白聚集的途径和聚集体的结构主要通过锌离子与朊蛋白八肽重复序列的相结合，进而导致其N端的柔性区域和C端的球状区域相互作用来实现。本文还将紫外和硫黄素T荧光同时联合使用，并通过紫外吸收光谱的波峰和波谷的比值来反应蛋白质的结构变化，用这三个参数作图可以划分朊蛋白聚集过程的不同阶段。上述研究有益于阐释锌离子在prion疾病中的作用，并有助于解释锌离子修饰朊病毒株型的分子机制。 本文运用Western Blot和激光共聚焦显微技术证实了锌离子可以在神经细胞中引起朊蛋白的聚集，并通过免疫电镜发现这些聚集很可能是寡聚体。本文还通过加入高浓度的维生素c来诱导神经细胞死亡，探讨了锌离子所引起的朊蛋白聚集和神经细胞死亡的关系，神经细胞的死亡是锌离子所导致的朊蛋白聚集的必要条件。 目录  TOC \o 1-3 \h \z \u  HYPERLINK \l _Toc427420175 中文摘要  PAGEREF _Toc427420175 \h I  HYPERLINK \l _Toc427420176 Abstract  PAGEREF _Toc427420176 \h III  HYPERLINK \l _Toc427420177 第一章 前言  PAGEREF _Toc427420177 \h 1  HYPERLINK \l _Toc427420178 1.1 朊病毒假说及其证实  PAGEREF _Toc427420178 \h 1  HYPERLINK \l _Toc427420179 1.2 Protein X  PAGEREF _Toc427420179 \h 4  HYPERLINK \l _Toc427420180 1.3 种间屏障和朊病毒株  PAGEREF _Toc427420180 \h 5  HYPERLINK \l _Toc427420181 1.4 细胞型朊蛋白概述  PAGEREF _Toc427420181 \h 8  HYPERLINK \l _Toc427420182 1.5 细胞型朊蛋白的生理功能  PAGEREF _Toc427420182 \h 10  HYPERLINK \l _Toc427420183