细胞培养技术--刘亮预案.pptx

细胞培养简介;细胞培养简介;细胞培养简介;细胞培养实验室安全;美国生物安全性法规和建议包含在由美国疾病预防控制中心 (CDC) 和国立卫生研究院(NIH) 制定、美国卫生和福利部颁布的《微生物和生物医学实验室生物安全》文件中。该文件规定了四个逐级升高的控制等级，依次称为生物安全 1 级至 4 级，介绍了按照操作某一制剂时对应的危险等级应遵守的微生物学准则、应使用的安全设备以及应采取的设施安全措施。 生物安全 1 级 (BSL-1) BSL-1 为适合大多数研究和临床实验室的基础防护等级，适用于不会导致健康正常人发生疾病的物质。 生物安全 2 级 (BSL-2) BSL-2 适用于经口吞入或者经皮肤、粘膜接触会导致人发生不同严重程度疾病的中度危险性物质。大多数细胞培养实验室至少应达到 BSL-2 等级，但是确切要求取决于所用细胞系以及开展的工作类型。 生物安全 3 级 (BSL-3) BSL-3 适用于已知可能会通过气体挥发传播的本地或外来性物质以及可导致严重、甚至致命感染的物质。 生物安全 4 级 (BSL-4) BSL-4 适用于具有高度个体风险、可通过感染性气体挥发导致威胁生命的不治之症的外来性物质。应将此类物质控制在高防范等级的实验室内。;安全数据表 (SDS)，又被称为材料安全数据表 (MSDS)，是一种包含某物质各种属性信息的表格。SDS 中包括诸如熔点、沸点和闪点等物理数据、有关该物质毒性、反应性、健康影响、储存和处置的信息，以及应对泼溅的推荐防护设备和措施。 细胞培养实验室的安全设备包括初级屏障，例如：生物安全柜、密闭容器及其他用于消除或尽量减少危险品接触的工程控制设备，以及常与初级屏障配合使用的个人防护设备(PPE)。生物安全柜 (即：细胞培养通风橱) 是最重要的安全设备，可以限制多种微生物学操作产生的感染性泼溅或气体挥发，并可防止您培养的细胞受到污染。 个人防护设备 (PPE) 在人员与危险品之间形成一道直接的屏障，包括用于个人防护的物品，例如：手套、实验室工作服和隔离衣、鞋套、靴子、呼吸器、面罩、防护镜或护目镜。个人防护设备常与生物安全柜及其他可限制所操作物质或材料的装置配合使用。;下列建议仅为实验室安全规范的指导原则，不应将其视为完整的工作准则。 ? 必须始终穿戴适当的个人防护设备。手套污染时应更换，将用过的手套与其他污染的实验室废物一起处置。 ? 操作可能具有危害的物质后以及离开实验室前应洗手。 ? 在实验室内不得进食、饮水、吸烟、处理隐形眼镜、涂抹化妆品或者存放供人食用的食物。 ? 遵守所在机构关于锐器 (即：针头、手术刀、吸管和破裂的玻璃器皿) 安全操作的准则。 ? 小心操作，尽量避免形成气体挥发和/或泼溅。 ? 实验开始前、结束后以及可能具有传染性的物质发生泼溅时，应立即使用适当的去污剂对所有工作台面进行去污。无论实验室设备是否被污染，均应定期进行清洁。 ? 在对可能具有传染性的物质进行处置前应先去除污染。 ? 发生事故可能导致感染性物质暴露时，应向相应人员 (例如：实验室主管、安全员)报告。;细胞培养实验室的具体要求主要取决于开展的研究类型；例如：专业从事癌症研究的哺乳动物细胞培养实验室与从事蛋白质表达工作的昆虫细胞培养实验室的需求相差甚大。但是，所有细胞培养实验室都要求内部没有致病性微生物存在 (即：无菌)，并且均有一些相同的细胞培养必需基本设备。 此部分列出了大多数细胞培养实验室共有的一些设备和用品，以及可使工作更为高效、准确或者可提高检测和分析范围的实用性设备。请注意此列表并非无所不包；任何细胞培养实验室的需求均取决于其所开展的工作类型。;? 细胞培养通风橱 (即：层流通风橱或生物安全柜) ? 培养箱 (推荐使用湿式二氧化碳培养箱) ? 水浴锅 ? 离心机 ? 冰箱和冰柜 (–20°C) ? 细胞计数器 (例如：CountessR 自动细胞计数器或血球计数器) ? 倒置显微镜 ? 液氮 (N2) 冷冻柜或冻存容器 ? 灭菌器 (即：高压灭菌器) ? 抽吸泵 (蠕动泵或真空泵) ? pH 计 ? 共聚焦显微镜 ? 流式细胞仪 ? 细胞培养容器 (例如：培养瓶、培养皿、滚瓶、多孔板) ? 吸管和移液器 ? 注射器和针头 ? 废物容器 ? 培养基、血清和试剂 ? 细胞;细胞培养实验室的主要要求是需要维持细胞培养工作区域处于无菌状态。尽管最好设置独立的组织培养室，在较大的实验室内划出的细胞培养区域同样可用于无菌操作、孵育以及细胞培养物、试剂和培养基的储存。获得无菌条件的最为简单、经济的方式就是使用细胞培养通风橱 (即：生物安全柜)。 细胞培养通风橱可提供无菌工作环境，同时限制多种微生物学操作产生的感染性泼溅或气体挥发。目前已经开发出 I 级、II 级和 III