单克隆抗体的制备7总结.pptVIP

概要;请简述多克隆制备过程。 采用的是把某种抗原反复注射到动物体内，然后从动物血清中分离出所需抗体的方法。 此类抗体作为诊断试剂有何缺点？ 产量低、特异性差、纯度低，反应不够灵敏。 为克服多抗的缺点，可用什么物质替代？ 单克隆抗体。;B;第四章　单克隆抗体制备;表位A;英文全称： monoclonal antibody,McAb 定义： 每一克隆B细胞所产生的理化性状高度均一、组成均一、只与同一种抗原决定族反应的抗体。;B;单克隆抗体制备思路：;体外;Hybridoma Technology and Production of Monoclonal Antibodies? - Monoclonal antibodies can be produced in specialized cells through a technique now popularly known as hybridoma technology. This technology was discovered in 1975 by two scientists, Georges Kohler of West Germany and Cesal Milstein of Argentina, who jointly with Niels Jerne of Denmark were awarded the 1984 Nobel, Prize for Physiology and Medicine. ; The Nobel Prize in Physiology or Medicine 1984 for theories concerning the specificity in development and control of the immune system and the discovery of the principle for production of monoclonal antibodies;;浆细胞 (B); 1.亲本细胞的选择 1)小鼠骨髓瘤细胞 a.稳定，易培养； 　b.它是B细胞恶性肿瘤，与脾细胞同源，融合率高； 　c.能与细胞杂交形成稳定的杂交瘤细胞，并分泌免疫球蛋白； 　d.本身不分泌免疫球蛋白； 　e.次黄嘌呤鸟嘌呤磷酸核苷转移酶(HGPRT)或胸腺嘧啶激酶(TK)缺陷的细胞株( ？)；; 1.亲本细胞的选择 1)小鼠骨髓瘤细胞 2)免疫脾细胞 经抗原免疫的BALB/c小鼠的脾细胞，具有分泌抗体的能力。;B;细胞融合剂： PEG:一般把分子量1000、1500、4000 的PEG是最常用的细胞融合剂 作用机理：诱导细胞膜上脂类物质结构重排，使细胞膜易打开而有助于细胞融合 作用特点：随机发生的，不同厂商、批号、分子量的PEG，其纯度与毒性有所不同;DNA RNA;;一、杂交瘤技术的基本原理;1、阳性杂交瘤细胞的克隆化;有限稀释法; 效率最高 价格昂贵 ;2、细胞的冻存及复苏;防止污染 避免染色体丢失 防止非分泌细胞的过度生长 防止细胞密度过高而死亡;抗原;三、杂交瘤技术制备单克隆抗体流程;一)、抗原的提纯与??物免疫;一)、抗原的提纯与动物免疫;二)、骨髓瘤细胞的制备;三)、饲养细胞;四)、细胞融合及筛选;五)、扩大再生产;六)、抗体的纯化及鉴定;六)、抗体的纯化及鉴定;四、单抗的优缺点 优点： 高特异性、高均一性、效价高； 　 适用于免疫标记技术； 　 适于放射性免疫显像和免疫导向治疗。 ;四、单抗的优缺点 缺点： 技术复杂、费时费工、价格较高； 　 不能用于凝集反应和沉淀反应； 　 对环境较为敏感(pH,温度,盐浓度)； 为鼠的IgG，长期用于人体不利。; 基因工程抗体 在基因水平上对编码抗体的基因进行切割、拼接或修饰，甚至人工合成，然后导入受体细胞内表达产生的抗体（单克隆抗体）。;;;单链抗体(ScFv):;谢谢！