生化分离工程实验2014修改版资料.ppt

生化分离工程实验;菌株的优化培养;结构解析;本次试验的主要内容;katB ;;;pMAL-c2系列的载体带有malE信号序列，能使融合蛋白穿过细胞膜。;;亲和作用原理;系统原理示意图; SDS（十二烷基硫酸钠）是一种阴离子表面活性剂。它能打断蛋白质的氢键和疏水键，包裹蛋白， 掩盖电荷差异和形状区别，使得电泳速率只与分子量有关。 聚丙烯酰胺凝胶是由丙烯酰胺 (Acr) 和交联剂N，N’—亚甲基双丙烯酰胺（Bis）在催化剂作用下，聚合交联而成的具有网状立体结构的凝胶，并以此为支持物进行电泳。引发剂是过硫酸铵(APS)，催化剂是四甲基乙二胺（TEMED）。 ;;浓缩效应和分子筛效应;注意事项：;生化分离工程实验安排;表达系统;配试剂;将超净台内PA瓶中剩余的菌液用枪吸取200 μl于 1.5 ml离心管中，10000 rpm离心1 min，弃上清(可用枪将上清吸尽)。 加入200 μl的无菌水洗涤菌体上残留的培养基， 10000 rpm离心1 min，弃上清，然后重悬于40 μl灭过菌的去离子水中，100 ℃煮沸15 min。 10000 rpm离心1min，取上清5 μl作为菌落PCR的模板。 ;PCR体系;琼脂糖凝胶电泳 ; 将加入诱导剂后的菌液再放入37 ℃，200 rpm的摇床中诱导培养4-5小时后收集菌体。 ;五、裂解细胞;系统;系统;Ni柱的清洗与保存