12第二章10节染色1123答案.pptVIP

第十节 染色;常用的染色方法 ;一、染色剂(染料)的种类;1、根据化学性质划分 ;发色团: 产生颜色的化学结构式“醌式环” ，是使化合物带颜色 的有色部分。 -无发色团的有机化合物是没有颜色的 助色团: 本身不发色而能使分子中发色团的吸收峰向长波长移动 并增强其强度的基团。 例：氨基、羧基、羟基、磺酸基、甲氨基、二甲氨基. 助色团的作用: 使染料分解成带电荷的离子,以便加强与被染物质组织的 亲和力。;定义:一类含有两个双键的六员环状二酮(含两个羰基)结构的有机化合物 分布:由于醌类具有不饱和酮结构，当其分子连接助色团后(- OH、-OMe等)多有颜色，故常作为动植物、微生物的色素而存在于自然界中。 应用:除有抗菌抗癌等生理活性而用于药品外，还应用于染料和指示剂的母体。;物体本身不会发光，之所以能看到它，是因为光源色经物体表面的吸收、反射和反映到视觉中的光色感觉引起的。 如物体在自然光下只反射其中一种波长的光，而其它波长的光全部吸收，这个物体则呈现反射光的颜色。 某一物体反射所有色光，便感觉这个物体是白色的； 吸收全部七色光，呈现一种黑色；;1. 核染料:能与细胞核染色质发生作用的染料, 如苏木精、番红、碱性品红等 2. 细胞质染料:能与细胞质发生作用的染料,如固绿、苯胺蓝、碱性品红等。 3. 细胞壁染料:能与细胞壁发生作用的染料, 如番红、苯胺蓝等。 4. 组织化学染料:与组织或细胞中待检物质发生化学反应成为有色沉淀的染料，如苏丹Ⅲ、碱性品红、苯胺蓝黑等。 5. 荧光染料:含荧光色团, 能与细胞中有特殊亲和力的物质相结合的染料, 包括DAPI、FITC、水溶性苯胺蓝等。 6. 活体染料:可用作细胞活体染色的染料,如中性红和许多荧光染料;;毛细作用或渗透作用:认为被染物质是有孔隙的，染料可以因为渗透作用而进入组织的内部。 吸收作用或溶液作用:组织吸收染液后进行牢固的结合，所染颜色与溶液的颜色相同，而与干燥的染料颜色不同。 如品红在干燥时为绿色，其溶液为红色，所染植物组织也是红色。 吸附作用:当染液浸入组织内时，染液中分散的色素粒子的分子 引力作用，使色素粒子被组织吸附，而呈现颜色。;1. 植物细胞内的不同化学成分，对染料有不同的亲和力，因此细胞具有选择性的着色能力，使细胞的不同成分染成不同颜色。 (1)细胞中的酸性物质，易被碱性染料所染。 (2)细胞内的碱性物质，易被酸性染料所染。 2. 染液的PH值对染色有很大关系， (1)碱性物质(如细胞质)在低PH(酸性)的染液内易着色; (2)酸性物质(如细胞核)在高PH(偏碱)的染液内易着色。;(一)根据染色时材料是否完整而分 1. 整体染色: 材料在未经切片前直接染色，后进行浸蜡、包埋和切 片等步骤，即先染后切。 2. 切片染色 3. 蜡带染色;Paraffin is removed from the slides with solvents. The tissues are routinely stained with Mayer’s hematoxylin (purple) and eosin (orange).;3. 蜡带染色: 切片后, 在展片的同时进行染色, 然后再烘干粘牢。;(二)根据染色时所用染料的种类而分 1. 单 染: 只用一种染料染色,如苏木精。 2. 二(双)重染色: 用两种染料染色,如番红-固绿,苏木精-曙红。 3. 三(多)重染色: 用三种(多种)染料染色,如番红-固绿-桔红G, 酸性品红-苯胺蓝-桔红G,番红-结晶紫-桔红G。;(三) 根据染液浓淡及是否使用分色剂而分 1.渐近法(积累法): 染色液较淡,材料放入较长时间,使其慢慢染至 合适为止。 2.后退法(回复法): 材料置浓染液中使其过度染色,再以分色剂使 其退色至适度,这种退色称分色. 方法- 酸性染料,以碱性溶液分色,反之以酸性溶液分色 (四) 根据是否使用媒染剂而分 1.直接染色: 不用媒染剂就能染色。 2.间接染色: 不能直接染色,必须经过媒染作用,使染料固着于媒染 剂,而媒染剂又固着于组织从而染色,称为间接染色。;1.媒染剂: 参与染料与组织的反应,促进染料的染色能力,二、三价的金属 盐或氢氧化物,如铝盐、铁盐及明矾、铝铵矾 2.促染剂: 能使染料对组织易于着色而本身不参与反应. 如番红中加苯胺,洋红中加硼砂,美蓝中加氢氧化钾,伊红内加少量的冰醋酸 3.分色剂: 为脱掉组织或切片过度染色的染料而使用的试剂. (1)酸性分色剂: 醋酸或盐酸,一般为0.1-1% 水溶液或70%酒精