5.3二维核磁共振波谱学课程.pptVIP

5.3 二维核磁共振波谱学;5.3 二维核磁共振波谱学; NMR技术在探索高聚物及生物大分子的化学结构及分子构象方面用以提供极其丰富的信息，尤其在研究蛋白质及核酸方面， 但NMR谱可获得的信息量巨大，甚至目前最高场强的磁场也不能够分辨和鉴定生物分子的常规一维谱的所有谱线特征。; 为了在一个频率面上而不是一根频率轴上容纳及表达丰富的信息，扩展NMR谱，使之大于一维已是非常重要的了，这就需要二维谱学。; 实际上，某些NMR谱提供的信息本质上是二维的。 例如，磁核的自旋-自旋偶合，在普通的一维谱中会导致不同的化学位移共振线的多重分裂。 自旋一自旋偶合使邻近的核自旋关联。; 相关信息是一种二维信息，最好用一个相关矩阵来表示： 行与列可以鉴定为个别的核，而非对角线矩阵元表示二特定磁核间的偶合， 这样的一张相关图确实可以用2D相关谱直接测量到。; 图中对角线代表常规的一维谱，而交叉峰则表示不同化学位移位置上的核自旋间的偶合的强度。;Date;Date;Date; 需要用二维谱表示的第三个现象是化学交换。 NMR谱上的化学位移的变化可用来表示分子组分在不同的化学环境间的交换， 用2D谱可以直观地表示化学交换过程，测定交换途径和速率常数。; 1974年，R．R．Ernst 用分段步进采样，然后进行两次傅里叶交换，得到了第一张2D NMR谱。 事实证明，2D NMR技术对生命科学、药物学、材料科学的研究和发展具有深远的意义。 ;5.3.1 二维NMR谱概述 在NMR测量中，自由感应衰减 FID 信号通过傅里叶交换，从时畴谱转换成频畴谱—谱线强度与频率的关系，这是一维谱，因为变量只有一个 —— 频率。 ; 当变化一些实验条件，如浓度、温度、pH值等，人们可以得到一系列谱线，虽然所变化的参数可以说是“第二个变量”，但这些谱线簇仍是一维谱，因为第二维的变量的作用一目了然，毋需通过计算表明。 与此类似，反转恢复法测定 Tl 的谱线簇亦属一维谱。;Date; 二维谱是有两个时间变量，经过两次傅里叶变换得到的两个独立的频率变量的谱图。 一般把第二个时间变量 t2 表示采样时间，第一个时间变量 t1 则是与 t2 无关的独立变量。 ; 二维谱有多种方式，但其时间轴可归纳为下面的方块图：; 预备期：预备期在时间轴上通常是一个较长的时期，它使实验前体系能恢复到平衡状态。 发展期（t1）：在 t1 开始时由一个脉冲或几个脉冲使体系激发，使之处于非平衡状态。发展期的时间 t1 是变化的。 ; 混合期（ ?m ）：在这个时期建立信号检出的条件。混合期有可能不存在，它不是必不可少的。 检出期（ t2 ）：在检出期内以通常方式检出FID信号。; 与 t2 轴相对应的ω2（或ν1）轴，是通常的频率轴，与 t1 轴对应的 ω1 是什么，则决定于在发展期是何种过程。; 二维谱的形成可以用图5-41说明。 图5-41（a）从左到右为 t2 增大的方向，曲线簇从下到上加；增大的方向。初始函数为 S(t1，t2）。对 t2 进行傅里叶变换，暂将 t1 作为非变量，结果如图5-41(b)所示。; 如果在图 5-41(b) 的左端作一截面，从右端（t1）的方向来看是一正弦曲线，进行对 t1 的傅里叶变换，最后得到 S(ω1，ω2)，如图5-41（c）。 ;可以用数学式来表达上述过程：; 图5-41(c) ：一个二维谱的典型例子。 二维NMR谱有两种主要展示形式。 一是堆积图，一是等高线图谱。 堆积图由很多条“一维”谱线紧密排列而成类似于图5-27中展示的反转恢复法测 T1 的线簇。堆积图直观，有立体感，但难以找出吸收峰的频率，大峰后面可能隐藏较小的峰。 ; 图5-41(c) ：一个二维谱的典型例子。 ;图5-27 反转恢复法测 T1 的线簇; 等高线图类似于等高线地图，最中心的圆圈表示峰的位置，圆圈的数目表示峰的强度。最外圈表示信号的某一强度C，其内的第二、三、四圈分别表示强度为2C、4C、8C等。 这种图示法的优点是易于找出峰的频率，作图快； 缺点是低强度的峰可能漏画。 等高线图较常采用。; 二维NMR谱可分为三大类: 1）J 分辨谱 2）化学位移相关谱 3）多量子谱 ; J 分辨谱亦称 J 谱，或称δ-J 谱。它的一个频率轴F1 包含偶合信息，另一个轴 F2 包含化学位移的信息。它把化学位移和自旋偶合的作用分辨开来。 ; 二维交换谱反映了由于化学位移，构象和分子