good第十四细胞增殖调控与癌细胞重点.pptVIP

第十四章 细胞增殖调控与癌细胞;检验点（checkpoint）;G1/S检验点 ：启动DNA的复制;1、MPF的发现及其作用 成熟促进因子(maturation promoting factor，MPF）, 又称有丝分裂因子(Mitosis-promoting factor), 早期称为M期促进因子(M-phase promoting factor, MPF)，是指M期细胞中存在的促进细胞分裂的因子;1970年，Johnson and Rao将同化的不同细胞周期的细胞诱导融合 早熟染色体凝集（染色体超前凝集）(Premature chromosome condensation,PCC)——超前凝集染色体;;卵细胞细胞质移植实验;2、MPF与 CDK激酶 (周期蛋白依赖性蛋白激酶) (1) MPF的构成 1988年， Maller实验室的Lohka将非洲爪蟾的MPF纯化。由两个不同的亚基组成的异质二聚体: p32和p45(非洲爪蟾)，使蛋白质底物磷酸化。 1983年 Tim Hunt发现海胆的卵裂过程中两种蛋白质的含量随细胞周期振荡，命名为周期蛋白(cyclin A和B)。后来发现各类动物来源的细胞周期蛋白mRNA均能诱导蛙卵的成熟。;;MPF：cyclin-Cdk 周期蛋白称为调节亚基 催化亚基从ATP上转移磷酸到丝氨酸和苏氨酸残基上 ;●催化亚基 是丝氨酸/苏氨酸型蛋白激酶 其活性有赖于周期蛋白，故该蛋白称为周期蛋白依赖性激酶(cyclin-dependent protein kinases,Cdks); ●调节亚基：周期蛋白(cyclin) ;1960s Leland Hartwell,1970s Paul Nurse 分别以芽殖酵母和裂殖酵母为实验材料，利用温度敏感突变株，发现许多与细胞分裂有关的基因(cell division cycle gene, cdc基因)。 – 裂殖酵母cdc2、芽殖酵母cdc28突变型在限制温度下无法分裂； – cdc2和cdc28都编码一个34KD的蛋白激酶，促进细胞周期的进行。 MPF=p34cdc2(p34cdc28)+ p56cdc13 (cyclinB) – weel和cdc25分别表现为抑制和促进CDC2的活性。 – wee1突变型则提早分裂，cdc25突变型细胞体积增大而不分裂；;Cdc 25 Wee1 mutant;Leland H. Hartwell R. Timothy (Tim) Hunt Sir Paul M. Nurse;CDK的活性调节及多样性;在动物中已知7种CDK。均含有一段相似的CDK激酶结构域，这一区域有一段保守序列，即PSTAIRE，与周期蛋白的结合有关,且其活性被周期蛋白调控。;;(2)不同类型的CDK/cyclin复合物及其参与的细胞周期调控 ;CDK inhibitor, CDKI对细胞周期起负调控作用，分为： – ①Ink4(Inhibitor of cdk 4): P16ink4a, P15ink4b, P18ink4c, P19ink4d。 P16ink4a特异性抑制cdk4·cyclin D1, cdk6·cyclin D1。 – ②Cip/Kip (cyclin inhibition protein1) (Kinase inhibition protein) ：P21cip1/WAF1 , P27kip1、P57kip2，抑制大多数CDK的激酶活性。P21cip1/WAF1对G1期CDK起抑制作用，还能与DNA 聚合酶δ 的辅助因子PCNA （ proliferating cell nuclear或antigen）结合，直接抑制DNA的合成。;Cdk活性可因抑制性磷酸化而受到抑制，并被抑制蛋白抑制;Cdk与不同的周期蛋白结合，引发不同的细胞周期事件. Cdk活性因周期蛋白降解而终止.;3、细胞周期蛋白(cyclin)的作用;含有周期蛋白框：介导与不同CDK结合;;;cell cycle regulation;4、细胞周期运转调控;CDK activating;;G2/M期转化与CDK1激酶的关键性调控作用;;（2）M期周期蛋白与细胞分裂中期向后期转换;APC活性调节：两类 正调控因子：cdc20/Fizzy, cdh1/Fzy等 负调控因子：Emi1, Emi2, Mad2, BubR1等; ;APC的活性调节控制周期蛋白B的降解 ◆当MPF的活性在有丝分裂中期达到最高峰时, 它被CDK所激活，即APC磷酸化后被激活； ◆接着发生周期蛋白B遍在蛋白多聚化, 引起周期蛋白B的降解； ◆由于周期蛋白B是MPF的一个必需亚基, 它的降解势必导致MPF的失活； ◆在G1期的后期,APC失活,使得周期蛋白B的浓度升高,同时