Hoechst 33258染色(综合).docVIP

Hoechst 33258染色 【原理】 Hoechst 33258，也称bisBenzimide H 33258或HOE 33258。分子式为C25H24N6O · 3HCl，分子量为533.88，CAS Number 23491-45-4。Hoechst 33258是一种可以穿透细胞膜的蓝色荧光染料，对细胞的毒性较低。Hoechst 33258 为特异性 DNA 染料，与 A-T 键结合，这种染料对死细胞或经 70% 冷乙醇固定的细胞可立即染色。而活细胞的着色是渐进性的，在 10min 内可达饱和。在荧光显微镜下，活细胞核呈弥散均匀荧光，出现细胞凋亡时，细胞核或细胞质内可见浓染致密的颗粒块状荧光。Hoechst 33258的最大激发波长为346nm，最大发射波长为460nm；Hoechst 33258和双链DNA结合后，最大激发波长为352nm，最大发射波长为461nm。【试剂与器材】 1. Hoechst 33258 贮存液： 称取 Hoechst 33258 试剂 1mg ，用 20ml 蒸馏水溶解后，滤过， 4℃ 避光保存。用时蒸馏水 10 倍稀释成染色液。用于细胞核染色时，推荐的Hoechst 33258工作浓度为0.5-10微克/毫升 2. 封片液（ pH5.5 ）： 20mmol/L 柠檬酸； 50mmol/L 磷酸氢二钠； 50% 甘油， 长春新碱 3. 细胞