生物制药 - 横版.docVIP

一、名词解释 生物技术制药：采用DNA重组技术或单克隆抗体技术或其他生物技术制造的蛋白质、抗体或核酸类物质统称为生物技术药物。 生物药物的药理学特性 ：1 活性强：体内存在的天然活性物质。治疗针对性强，基于生理生化机制。毒副作用一般较少，营养价值高。可能具免疫原性或产生过敏反应。 生物制品 ：用基因工程、细胞工程、发酵工程等生物学技术制成的免疫制剂或有生物活性的制剂。可用于疾病的预防、诊断和治疗。 转基因动物制药：将外源基因导入哺乳动物的受精卵或胚胎中，使导入基因与受精卵染色体整合，并将外源基因稳定性传给子代，使子代表现外源基因的性状。 RNA干涉：是指在生物体细胞内，dsRNA（双链RNA）引起同源mRNA的特异性降解，因而抑制相应基因表达的过程。 固定化酶：凡限制在一定的空间范围内并能连续反复的使用的酶都称为固定化酶。 模体：模体表示具有特定功能的或作为一个独立结构域一部分的相邻的二级结构的聚合体，它一般被称为功能模体或结构模体，相当于超二级结构。 变构调节：变构调节是指某些调节物能与酶的调节部位结合使酶分子的构象发生改变，从而改变酶的活性。 SD序列：在原核生物中核糖体中与mRNA结合位点位于16rRNA的3’端，mRNA中与核糖体16srRNA结合的序列称为SD序列。 协同效应：一个寡聚体蛋白质的一个亚基与其配体结合后，能影响此寡聚体中另一个亚基与其配体结合能力的现象称为协同效应。 竞争性抑制作用：抑制剂与底物的结构相似，能与底物竞争酶的活性中心，从而阻碍酶底物复合物的形成使酶的活性降低。 代谢工程：所谓代谢工程，即采用基因工程的手段，使工程细胞增加或减少某种酶，改造它的代谢能力和途径，使其降低对某些营养物质的需要，减少某些代谢产物的产生和危害，以及控制工程细胞的增殖速度和制造产品的能力。 亲和层析:亲和层析是利用固定化配体与目的蛋白质之间非常特异的生物亲和力进行吸附，这种结合既是特异的，又是可逆的，改变条件可以使这种结合解除。 多克隆抗体：由多种抗原决定簇刺激机体，相应地就产生各种各样的单克隆抗体，这些单克隆抗体混杂在一起就是多克隆抗体。 克隆：克隆是指生物体通过体细胞进行的无性繁殖，以及由无性繁殖形成的基因型完全相同的后代个体组成的种群，通常是利用生物技术。（由无性生殖产生与原个体有完全相同基因组织后代的过程。 二、简答题 生化制药工艺中分离纯化特点：（1）生物材料组成复杂（2）目的物含量低（3）易变性、失活（4）分离方法有很大经验成分（5）步骤多，逐级分离（6）产品验证与化学上纯的概念不完全相同 菌种退化防止方法：（1） 防止基因突变：如低温保藏（2）采用双重缺陷型（3） 制作平行的菌种斜面，少传代 （4）分离单菌落，自然筛选（4） 选择培养条件 基因工程操作过程：（1）获得目的基因（2）构建DNA重组体（3）将重组体导入宿主细胞（4）工程菌的克隆与鉴定（5）目的基因扩增与蛋白表达 干燥法的优点 冷冻干燥法具有保持产品成分稳定，抑制微生物生长和酶的降解，使之可长期保存等优点，非常适用于制备热敏性和粘稠性特点的生物物质的干燥，是制备生物制品的常规方法。 发酵的基本过程 菌种→→种子制备→→发酵→→发酵液预处理→→提取精制 固定化细胞的特点 固定化细胞既有细胞特性，也有生物催化剂功能，又具有固相催化剂特点，其优点在于： 无需进行酶的分离纯化 细胞保持酶的原始状态，固定化过程中酶的回收率高 细胞内酶比固定化酶稳定性更高 细胞内酶的辅因子可以自动再生 细胞本身含多酶体系，可催化一系列反应 抗污染能力强 同时固定化细胞技术也有它的局限性 利用的仅是胞内酶，而细胞内多种酶的存在会形成不需要的副产物 细胞膜、细胞壁和载体都存在着扩散限制作用 载体形成的孔隙大小影响高分子底物的通透性 9．悬浮培养的优点 该培养方法的优点是操作简单，培养条件比较均一，传质和传氧较好，容易扩大培养规模，在培养设备的设计和实际操作中可借鉴许多有关细菌发酵的经验。 10.微囊培养法的优点 ①包埋或包裹在载体或微囊内的细胞可获得保护，避免了剪切力的损害 ②可获得较高的细胞密度 有利于下游产物的纯化 可采用多种生物反应器进行大规模培养 三、问答题 1． 肌苷发酵工艺及控制要点：1、碳源大多用葡萄糖2、常用氮源有氯化铵、硫酸铵或尿素等3、磷酸盐对肌苷生成有很大影响4、肌苷生产菌株一般为腺嘌呤缺陷型菌株，需加入适量腺嘌呤，腺苷酸控制IMP生物合成的主要因子。5、氨基酸有促进肌苷积累，同时节约腺嘌呤用量的作用。6、培养基以外的发酵调节 2.基因工程药物的分离纯化过程 细胞破碎、固液分离、浓缩与初步纯化、高度纯化直至得到纯品，成品加工 细胞破碎→→固液分离→→浓缩→→初步分离→→高度纯化→→产品 3.克隆抗生素生物合成基因的集中方法 ①在标准宿主系统