TLR4对饮食诱导胰岛素抵抗小鼠血浆microRNA表达谱影响研究.pdfVIP

目录 目 录 中文摘要……………………………………………··………………·1 英文摘要………………………………………………………………5 研究论文 前言………………………………………………………………12日【J吾”“……“……”“”““……………””…””…”…““……12 实验仪器与材料…………………………………………………14 实验方法与步骤…………………………………………………20 结果…………………………………···…………………………28 附图………………………………………………………………34 附表………………………………………………………………43 讨论……………·…··………···…………………………………55 结论………………………………………………………………58 参考文献…………………………………………………………58 综述……………………………………·…····…·…………………64 致谢……………………………………………………………………75 个人简历………………………………………………………………76 万方数据 中文摘要 影响研究 摘 要 肥胖被认为是21世纪公共健康的最大威胁，肥胖不仅使患者忍 受生活质量和期望值的降低，而且提高了2型糖尿病、心血管疾病、 肝的脂肪变性和癌症的发病风险。肥胖相关的胰岛素抵抗是糖尿病等 多种疾病起始进程的早期事件，与血脂障碍、高血压、葡萄糖耐受不 良和内皮组织功能紊乱相关。大量研究表明，肥胖、胰岛素抵抗患者 呈现低水平的炎症反应，慢性炎症是导致胰岛素抵抗的一个重要原 因。Toll样受体4 Toll．1ike 样受体家族的一个成员，在病原识别和固有免疫反应中发挥重要作 用。最近研究发现，TLR4不仅参与病原微生物入侵的天然免疫应答，1 许多无菌的炎症导致的疾病，包括肥胖的发生、发展及预后，同样与 TLR4信号有关。因此，TLR4在肥胖相关的胰岛素抵抗中的作用值得 的单链非编码RNA分子，通常由19～22个核苷酸构成。其主要通过 抑制靶基因的翻译过程，在转录后水平负性调控基因表达。近几年， 国内外学者相继报道miRNAs可以影响体内的多种代谢过程，包括糖 脂代谢、胰岛素分泌、细胞分化和炎症反应。一些miRNAs已被确定 在胰岛素作用的靶组织 肝脏、脂肪组织、骨骼肌 中具有重要的生 理作用。进一步的研究证实miRNAs不仅存在于细胞内，在细胞外也 可稳定存在，且在不同病理状态下，某些血浆miRNAs水平发生特异 性改变，推测血浆miRNAs检测可能成为疾病早期诊断的新一代生物 学标志物。那么，高脂饮食诱导胰岛素抵抗时，血浆miRNAs表达谱 是否发生改变、此改变是否与TLR4信号相关，目前尚不清楚。为此， 我们建立了高脂饮食诱导的胰岛素抵抗小鼠模型，筛选了胰岛素抵抗 状态下血浆差异表达的miRNAs；进一步给予胰岛素抵抗小鼠TLR4 miRNAs与高脂饮食诱导胰岛素抵抗的关系。 万方数据 中文摘要 本实验首先建立高脂饮食诱导的胰岛素抵抗小鼠模型。选取 出生2l天的雄性C57BL／6小鼠36只，随机分为2组，正常对照 fat 组12只，以普通基础饲料喂养 10wdiet，LFD ，高脂饮食实 fat diet，HFD 。待两组小鼠 验组24只，给予高脂饲料喂养 high tolerance 体重出现显著差异时，进行葡萄糖耐量实验 glucosetest， tolerance GTT 和胰岛素耐量实验 insulintest，ITT ，观察小鼠胰 岛素抵抗的发生。 小鼠胰岛素抵抗模型建立后，观察TLR4抑制剂TAK-242对 小鼠胰岛素抵抗的作用。LFD组小鼠继续以基础饲料喂养 即作 LFD对照组 ；HFD组小鼠随机分为2组，每组12只小鼠，均继 续以高脂饲料喂养，其中一组HFD小鼠腹腔注射TLR4抑制剂 TAK．242，以O．5mgTAK．242g体重的计量给予，每周2次 即 鼠作为单纯高脂饮食的胰岛素抵抗空白对照组 HYD．C组 ，只给 予等体积的溶媒．二甲基亚砜 DMSO 。给予小鼠TLR4抑制剂5 个月，进行GTT和ITT后，处死小鼠。采用EDTA．K2抗凝管收集 bloodmononuclear 血液标本，立即分离外周血单核细胞 peripheral cell，PBMC 和血浆。 应用WesternBlot技术检测PBMCTLR4蛋白表达水平。采用 全自动生化分析仪测定血浆葡萄糖 GLU 、甘油三酯 TG 、总 胆固醇 TC 、高密度脂蛋白胆固醇 固L．C 、低密度脂蛋白胆 固醇 LDL．C 、丙氨酸氨基转移酶 ALT 的水平。应用小鼠 miRNAs。 应用生物信息学方法，以TLR4及其信号传导通路为中心，预测 集分析，以判定差异miRNAs主要影响的生物学功能