第九章基因敲除与药学.pptVIP

第九章：基因敲除与药学 ;基因敲除技术与诺贝尔奖;基因敲除简介;基因敲除（gene knock-out） 通常所说到的基因敲除，又称基因打靶，通过外源DNA与染色体DNA之间的同源重 组，进行精确的定点修饰和基因改造，把具有功能的同源序列置换出来，造成功能基因的缺失或失活。 ;; 要有将外援基因导入宿主细胞的载体 2.能接受外援基因的受体（常用胚胎干细胞）;基因敲除载体 通常，我们将外源基因DNA片段通过相应载体导入ES细胞中，一个好的载体应具备以下特点： 能在宿主细胞中稳定存在 2.具有多个限制性内切酶的单一酶切位点，即 multiple cloning site(MCS),便于外源基因的插入。常用质粒。 ;3. 具有一个以上的遗传标志，便于对基因重组的ES细胞进行筛选。 常用的筛选标记为正负筛选：Neo（新霉素磷酸转移酶）基因阳性筛选标记和HSV-tk（单纯袍子病毒 胸腺嘧啶激酶）基因阴性筛选标记。 ;Neo新霉素基因阳性的ES细胞可以再含有G418（一种新霉素的类似物）的培养基上生长。 HSV-tk基因阳性的ES细胞，编码的基因产物可以将更昔洛韦等转化为有毒物质，将细胞杀死。;胚胎干细胞（简称ES细胞） 胚胎干细胞是早期胚胎中分离出来的一类细胞， ;（1）基因敲除载体的构建 Step1. 获得目的基因（待敲除基因）的同源片段，将此DNA片段克隆到一般质粒中； S