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武义县高中生物实验技能提升培训（二） 组织单位：县教研室 指导专家： 蓝伟侦 培训内容：几种植物染色体体核型分析 蓝伟侦在作“染色体核型分析”讲座 材料： 表1 紫景天和四种龙葵的性状比较 种类果实颜色果实特征分布区紫景天 黄果龙葵 少花龙葵 浙江龙葵 苏联龙葵褐色 黄绿色 亮黑紫色 黑色 黑紫色果小 ，卵状椭圆形 粒细小，白中稍带黄 粒较小，白色稍泛绿 粒较小,白色 粒大,乳白色全国 东北零星分布 南方各省区 浙江北部 北方各省区紫景天、少花龙葵、浙江龙葵、黄果龙葵和苏联龙葵种子，由湖州师范学院张海洋教授提供，通过培养种子并获得相应的根尖。 表2 各稻种的染色体数、基因组及地理分布 稻种名称 Name of species染色体数目 Chromosome number基因组 Genome分 布 Distribution栽培稻(O. sativa L.) 非洲栽培稻(O. glaberrima) 疣粒野生稻(O. meyeriana) 药用野生稻(O. officinalis) 宽叶野生稻(O. latifolia) 高杆野生稻(O. alta) 斑点野生稻(O. punctata) 栽培稻×药用野生稻F1植株 BC1植株(栽培稻回交) BC1植株(药用野生稻回交) 药用野生稻单体附加系(MAAL 8)24 24 24 24 48 48 48 24 36 36 25AA AA GG CC CCDD CCDD BBCC AC AAC ACC AA+C全世界 西非 南亚、东南亚 亚洲热带、亚热带、 澳大利亚热带 拉丁美洲 拉丁美洲 非 洲 — — — —材料由华南农业大学卢永根院士、武汉大学何光存教授和李刚博士提供。 2 主要的化学药品和试剂 实验中用到的主要实验药品见表3。 表3 实验中主要的化学药品及试剂 名称纯度来源乙醇 冰醋酸 盐酸溶液 果胶酶 纤维素酶 硫酸铁铵 氯化钠颗粒 柠檬酸钠 甘油 甲醇 磷酸二氢钠 磷酸二氢钾 氯化钾 柠檬酸 Giemsa粉 PI (碘化丙啶) DAPI 生物素化dUTP 地高辛化 dUTP分析纯 分析纯 分析纯 生物纯 生物纯 分析纯 分析纯 分析纯 分析纯 分析纯 分析纯 分析纯 分析纯 分析纯 分析纯 生物纯 生物纯 生???纯 生物纯杭州长征化学试剂有限公司 杭州化学试剂有限公司 无锡市晨阳化工有限公司 Fluka公司 上海伯奥生物科技有限公司 湖州湖试化学试剂有限公司 无锡市晨阳化工有限公司 中国医药(集团)上海化工有限公司 浙江杭州双林化工试剂厂 杭州萧山化学试剂厂 无锡市晨阳化工有限公司 上海统亚化工科技发展有限公司 宁波市化学试剂厂 国药集团化学试剂有限公司 国药集团化学试剂有限公司 Sigma公司 Roche公司 华美生物工程公司 Roche 公司 3 主要仪器与设备 主要仪器与设备见表4。 表4实验中用到的仪器与设备 名称型号制造商或产地光照培养箱SPX-250B-G上海博讯实业有限公司医疗设备厂4℃与-20℃冰箱BCD-215K海尔集团恒温水浴箱HH-4金坛市杰瑞尔电器有限公司架盘药物天平HC-TP11-2上海精密科学仪器有限公司成像处理软件Photoshop CS 5.0美国定性滤纸GB/T1914-93杭州新华纸业有限公司干燥器--显微镜 荧光显微镜XSP-2CA OLYMPUS BX61上海 日本 4 主要试剂的配制 ⑴ 卡诺固定液：酒精：冰醋酸=3：1（体积比）混合，置4℃冰箱保存备用，作用是迅速杀死细胞，使之在形态上和内部结构上保持生活时的完整和真实状态，并且能将细胞在生活情况下不易观察清楚的结构清晰显现。 ⑵ 对二氯苯饱和溶液：实验室提供，作用是对根尖进行预处理，改变细胞质的粘度，抑制和破坏纺锤丝的形成，促使染色体缩短和分散，有利于对有丝分裂中染色体的观察和计数。 ⑶ 1%盐酸溶液：实验室提供，调pH。 ⑷ 2%果胶酶和纤维素酶：将果胶酶与纤维素酶1：1混合，使分生组织细胞间的果胶质分解，细胞壁软化或部分分解，使细胞和染色体容易分散压平。 ⑸ 苏木精染液：实验室提供，使染色体染上较深的颜色，分色清晰，照像效果较好，利于标本长期保存。 ⑹ 硫酸铁铵：实验室提供，在进行苏木精染色前进行媒染，使苏木精染色效果更好。 ⑺ 2ⅹSSC：Nacl粉末17.5g，柠檬酸钠粉末8.8g，加入100mlddH