遗传学实验重点.pptVIP

注意安全！ 1.穿实验服。 2.各项操作务必规范，小心谨慎。对有毒有害物质进行操作时，要做好防护。 3.避免在实验室吃喝食物。 4.遵守实验室其他安全守则。 实验报告格式 实验名称 实验人员姓名 学号 实验时间 一、实验目的 二、实验原理 三、实验步骤 四、实验结果 实验一 果蝇的培养、形态观察及整体装片的制作 （一）果蝇的生活史 （二）果蝇的培养及杂交 （三）果蝇整体装片的制作 １、制片：取轻度麻醉的雌雄果蝇各一只放在载玻片上，待果蝇将醒能动时，滴一滴树胶在果蝇上，盖上盖玻片，让盖片自然沉降，要防止气泡产生。滴树胶的量以浸没果蝇，盖上盖片不外漏为度。 ２、观察：果蝇的背部横纹、雄果蝇的性梳。 （四）作业 制作一张良好的装片，要求能够看到果蝇的背部横纹及性梳。 实验二果蝇的伴性遗传实验 一、实验目的 　　　　　　 三、实验步骤 四、实验记录及结果分析 实验三 果蝇巨染色体的制片与观察 一 实验目的 1、练习果蝇幼虫的解剖技术及果蝇唾腺染色体的制片方法 2、观察果蝇的唾腺染色体 二 实验原理 三 实验步骤 1、取材(三龄幼虫，5mm) 取一张载玻片放在双筒解剖镜下，滴一滴生理盐水，将幼虫放在生理盐水内。两手各握一枚解剖针，一枚钉住幼虫末端的1/3处固定幼虫，另一枚解剖针钉住幼虫头部，前拉，把头部自身体拉开，可看到唾腺，剔除唾腺周围的脂肪及其它物质。 四 作业 制作果蝇巨染色体装片 画出你所观察到的果蝇巨染色体，并加以标注与描述。 实验目的 1、了解从细胞中提取DNA的基本原理 2、学习从口腔脱落细胞中提取高分子量DNA的基本操作步骤和会影响提取效果的注意事项。 实验原理 DNA提取的方法： 浓盐法 阴离子去污剂法 苯酚抽提法 水抽提法 金属螯合树脂抽提法 实验步骤 1、先用清水漱口。然后用舌头舔颊粘膜上颚、用牙刮颊部，嘬咀，用分泌出的唾液反复漱口；将唾液吐到杯中。用1ml生理盐水洗涤，后将1.5ml液体转入1个干净的EP管中，2000rpm离心5分钟，倒掉上清。 2、重复用1.0ml生理盐水洗涤沉淀1次，离心，去上清。 3、沉淀中加500μl 1x细胞裂解液（STE），打散细胞团、混匀，再加15μl 20mg/ml蛋白酶K，充分混匀。 55℃水浴30min。 4、加500μl饱和酚，轻摇混匀，室温12000rpm离心10min。 5、上清（注意不要吸到中间层白色絮状物质以及下层有机相）移至另一加入装有500μl氯仿的EP管，轻摇混匀，室温12000rpm离心10min。 6、吸取400μl上清（注意不要吸到中间层白色絮状物质以及下层有机相）至已装有900 μl预冷无水乙醇的离心管，混合均匀，可见白色絮状沉淀，10000rpm离心5min，DNA沉淀在管底。 7、去上清，加入70%乙醇1ml清洗沉淀，10000rpm离心5min，去上清（尽量用小枪头将液体去干净，但注意不要将沉淀也吸走），室温干燥5min，再用50μl TE buffer溶解沉淀，4℃储藏备用。 作业 提取人类口腔脱落细胞基因组DNA。 实验四 从口腔脱落细胞中提取人类基因组DNA 破坏细胞的细胞膜，释放出DNA。 1.用蛋白酶K（使膜上蛋白变性分解）和去污剂SDS（破坏细胞膜的脂质结构）共同消化细胞。 2.然后酚、氯仿等有机溶剂进行抽提，进行DNA的纯化，去掉蛋白质、RNA、多糖等生物大分子。 3.最后用无水乙醇沉淀DNA，干燥后用TE溶解，在4℃下可保存一年。 DNA纯度和浓度鉴定 紫外分光光度计测OD值、琼脂糖凝胶电泳检测。 1 OD260=0.05μg/μl DNA 纯品DNA： OD260/OD280=1.8 1.8 有RNA 1.8 有蛋白 琼脂糖凝胶电泳，可以看到一条基因组DNA条带。 实验五  PCR法鉴定人SRY基因 实验目的 1.认识性别决定基因SRY，了解生物的性别是由基因决定的。 2.了解PCR方法鉴定基因的原理及步骤。 * 实验原理 SRY基因在哺乳动物的性别分化过程中起着决定性的作用，该基因只存在于雄性个体中。以人为研究对象，对SRY基因进行PCR扩增，若测试者是男性，样本中存在该基因，测试结果为阳性；女性测试者则会相应得到阴性结果。 人SRY基因位于Yp11.3，只含有一个外显子，没有内含子，转录单位长约1.1kb，编码一个204氨基酸的蛋白质。 实验步骤 （一）获取口腔脱落细胞，提取DNA （二）PCR扩增SRY基因 （三）电泳检测SRY基因 （SRY基因扩增条带大小约为420bp。） PCR反应体系（共25ul ） 10X缓冲液： 2.5ul