Trizol法提取细菌总RNA.docVIP

实验三 Trizol法提取细菌总RNA 一、实验原理 Trizol主要物质是异硫氰酸胍，它可以破坏细胞使RNA释放出来的同时，保护RNA的完整性。加入氯仿后离心，样品分成水样层和有机层。RNA存在于水样层中。收集上面的的水样层后，RNA 可以通过异丙醇沉淀来还原。无论是人、动物、植物还是细菌组织，Trizol法对少量的组织 50-100 mg 和细胞 5×106 以及大量的组织 1 g 和细胞 107 均有较好的分离效果。Trizol试剂操作上的简单性允许同时处理多个的样品。所有的操作可以在一小时内完成。Trizol抽提的总RNA能够避免DNA和蛋白的污染。 主要试剂Trizol 溶液氯仿异丙醇75%乙醇DEPC水 超净工作台 mL离心管）移液枪 紫外分光光度计 石英比色皿泳槽和模具电泳仪凝胶成像系统大肠杆菌 实验步骤 . 采用 Trizol 溶液提取细菌的总 RNA 1. 挑取菌单菌落，培养至稳定期，取菌液 mL 于 mL离心管离心得菌体； 每管加入 1 mL Trizol 溶液，盖紧管盖，激烈振荡15 s，室温静置5 min 4，12000 g，离心 10 min；取上清转入 约 1 mL 新的 m L离心管中； 每管加入 0.2 mL 的氯仿 0.2 体积 Trizol ，盖紧盖，剧烈振荡 15 s；室温静置 3 min；4, 12000 g, 离心 10 min