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标准曲线法测定还原糖量
[1]葡萄糖绘制标准曲线
本试验选择3，5一二硝基水杨酸 DNS 法[5]测定还原糖量
【所需配制试剂】DNS试剂，葡萄糖标准溶液
【所需仪器】25mL带刻度试管，恒温水浴锅，分光光度计
【原理】
3，5一二硝基水杨酸与还原糖溶液共热后，3，5一二硝基水杨酸则被还原成红色氨基化合物，并在一定的范围内，还原糖的量与反应溶液所呈现颜色深浅的程度成正比。因此通过3，5一二硝基水杨酸试剂还原糖的呈色反应，可以用分光光度计法测定酶促反应后生成的还原糖量，从而测出蔗糖水解的速度和酶活性。
DNS试剂配制：
将0．639DNS和26．2mlNaOH 2M／L 溶液，加到50mL含有18.29酒石酸钾钠的热水中，再加0．59结晶酚和0．59亚硫酸钠，搅拌溶解，冷却后加蒸馏水定容至500ml，至于棕色瓶中备用。
取11支25ml的刻度试管，编号，按表1所示的量，精确加入浓度为1mg／mL的葡萄糖标准液和3，5一二硝基水杨酸试剂。摇匀各管，沸水浴加热5min，取出后立即放人盛有冷水的烧杯中冷却至室温，以蒸馏水定容至25mL，充分混匀。在540nm波长下，用1号管调零，分别读取2号一11号比色管的吸光度 abs 。以abs为纵坐标，葡萄糖mg数为横坐标，绘制标准曲线图MJ。求得标准曲线回归方程为：，，y 0．0297x一0．0028；R2 0．9928。
m：由回归方程求得的还原糖重 mg ；
n: 稀释倍数；
V：酶液的总体积 mL ；
W：样品重 g ；
t：时间 10min ；
1000:毫摩尔转化为微摩尔的倍数。
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