植物根系活力的测定.docVIP

实验二? 植物根系活力的测定 植物根系是活跃的吸收器官和合成器官，根的生长情况和活力水平直接影响地上部的营养状况及产量水平。本实验学习测定根系活力的甲烯蓝法。 【原理】 根据沙比宁等的理论，植物对溶质的吸收具有表面吸附的特性，并假定被吸附物质在根系表面形成一层均匀的单分子层；当根系对溶质的吸附达到饱和后，根系的活跃部分能将吸附着的物质进一步转移到细胞中去，并继续产生吸附作用。在测定根系活力时常用甲烯蓝作为吸附物质，其被吸附量可以根据吸附前后甲烯蓝浓度的改变算出，甲烯蓝浓度可用比色法测定。已知1mg甲烯蓝形成单分子层时覆盖的面积为1.1m2，据此可算出根系的总吸收面积。从吸附饱和后再吸附的甲烯蓝的量，可算出根系的活跃吸收表面积，作为根系吸收活力的指标。 【材料、仪器与试剂】 1.材料：植物根系。 2.仪器及用具：分光光度计；移液管；烧杯；比色管。 3.试剂：0.01 mg?mL-1甲烯蓝溶液；0.0002 mol?L-1（0.075 mg?mL-1）甲烯蓝溶液。 【方法与步骤】 1. 甲烯蓝标准曲线的制作 按表2－1用0.01 mg?mL-1甲烯蓝溶液配制系列标准溶液，于660 nm处测定吸光度，以甲烯蓝浓度为横坐标，吸光度为纵坐标，绘制标准曲线。 表2－1??? 甲烯蓝系列标准溶液的配制 试剂/mL 管号 0 1 2 3 4 5 7 0.01 mg?mL-1甲烯蓝/mL 0 1 2 3 4 5 6 蒸馏水/mL 10 9 8 7 6 5 4 甲烯蓝浓度/μg?mL-1 0 1 2 3 4 5 6 2. 将待测的植物根系洗净沥干，浸在装有一定量水的量筒中，用排水法测定根系的体积（或用体积计测定）。 3. 将0.0002 mol?L-1的甲烯蓝溶液（每毫升溶液中应含0.075 mg甲烯蓝，为消除溶液配制和比色误差，其含量需要重新进行比色，查标准曲线确定）分别倒入3个小烧杯中，编号，每个烧杯中溶液体积约10倍于根系的体积。准确记下每个烧杯中的溶液量。 4. 将洗净的待测根系，用吸水纸小心吸干，然后依次浸入盛有甲烯蓝溶液的烧杯中，每杯中浸1.5 min，注意每次取出时，都要使根上的甲烯蓝溶液流回到原杯中去。 5. 从3个小烧杯中各吸取甲烯蓝溶液1 mL，用去离子水稀释10倍后，于660 nm处测定吸光度，根据标准曲线，查得各杯浸根后甲烯蓝的浓度。 【结果与计算】 （1）总吸收面积（m2） [（ c1—c1’）×v1+（c2—c2’）×v2]×1.1 （2）活跃吸收面积（m2） [（c3—c3’）×v3]×1.1 （3）活跃吸收面积% 根系活跃吸收面积（m2）/根系总吸收面积（m2）×100% （4）比表面积（cm2·cm-3） 根系总吸收面积（cm2）/根体积（cm3） 式中　c：各杯未浸泡根系前的甲烯蓝浓度（mg?mL-1）； c’：各杯浸泡根系后的甲烯蓝浓度（mg?mL-1）； v：各杯中的溶液量（mL）。 【思考题】 1. 在TTC法和甲烯蓝法测定根系活力的过程中哪些环节容易产生误差？如何减少这些误差？ 2. 在TTC法中，保温结束后加硫酸与否对实验结果有何影响？