第五章_植物种质的保存技术和人工种子在农业方面的应用分析.ppt

第五章 植物种质的保存技术和人工种子在农业方面的应用 种质保存、人工种子的制备、植物的大规模快速繁殖等。 优点：不占用耕地，不受地理、气候等条件的影响，可以快速、大量地进行工厂化生产，生产效率高，种质长期稳定。 第一节 植物种质的保存 种质保存(germplasm conservation)是指利用天然环境或人工创造的适宜环境来保存种质资源，使个体中所含有的遗传物质保持其遗传完整性，且具有高的生命活力，并能通过繁殖将其遗传特性传递下去 原地保存(insitu conservation)：在自然生态环境下，主要是通过建立自然保护区和天然公园就地保存自我繁殖的种质。 异地保存(exsitu conservation)：将种子或植物体保存于该植物原产地以外的地方，主要是通过植物园、种质圃、种子库及离体保存来完成。 离体种质保存 在无菌环境下进行植物组织或细胞培养，然后将这些培养得到的植物组织或细胞在一定条件下保存，使其缓慢生长或停止生长，以达到长期保存的目的。在需要的时候，可以将保存的组织或细胞取出，给予适宜的条件，使其迅速恢复正常生长。 ①占用空间小，保存数量大。 ②减少了受病虫害侵袭的可能性。 ③以植物细胞的形式保存的种质具有很强的再生能力，在合适的条件下，短期内便可得到大量的无性系植株。 一、继代培养保存 在一定条件下，每隔—段时间，将植物细胞或组织进行新一轮的继代培养，以达到保存种质的目的。继代培养所用的温度通常是植物细胞培养的常用温度(25℃左右)，也可以是自然温度，所以又称为常温保存. 对生长较慢和冷敏感(如热带和亚热带植物)种质有较好的效果。 萝芙木、柑橘、龙眼 二、限制生长保存 通过改变培养基的组分或环境条件，使组织或细胞的生长速率降低到最低限度，而达到种质保存的一种保存方法。 1．降低培养温度 通过降低温度而进行种质保存的方法称为低温保存法。 冷藏(0－10℃)保存和冷冻(-80－0℃) 二、限制生长保存 2．调整培养基养分水平 通过调整培养基的养分水平，可有效地限制植物细胞的生长。 3．添加高渗物质 提高培养基的渗透压：10%蔗糖或3-4%的甘露醇，山梨醇。 这类化合物提高了培养基的渗透势负值，造成水分逆境，降低细胞膨压。使细胞吸水困难，减弱新陈代谢活动，延缓细胞生长。 4．添加生长抑制剂 ABA 5-10mg/L；PP333 2－5mg/L；甲基氨基琥珀酸（B9 ） ；CCC 25mg/L；青鲜素(MH)；高效唑S3307；。 大蒜细胞在添加脱落酸、矮壮素的培养基上保存25个月成活率仍达90％以上。 5．降低培养环境中氧含量：降低培养瓶内氧分压，类似气调保鲜。 最简单的方法是在保存材料上加盖一层矿物油，从而使供给材料的氧气量降低 6、培养物的干燥保存：适度风干后于培养基中保存。 三、超低温保存 低温保存（cryopreservation）是由cryo和preservation组成，cryo为前缀，意为低温、冷、冰、霜。低温所涉及的温度范围是不确定的。 超低温保存是指在-80℃以下的超低温中保存种质资源的一整套生物学技术。超低温常用干冰(-79℃)、深冷冰箱、液氮(-196℃)及液氮蒸汽相(-140℃)获得 。 由于冷源通常选用液氮，因此超低温保存又称液氮保存或LN(-196℃)保存。 基本原理：液氮(-196℃) 中几乎所有的细胞代谢活动、生长过程停止，仅细胞活力和形态发生的潜能保存下来，并且排除了细胞的遗传变异。 三、超低温保存 超低温保存的三个重要操作步骤：一是细胞预冻；二是细胞在－196℃下长期贮存；三是细胞解冻。 保存成功关键：降温冰冻过程中避免细胞内结冰。 目前常用的超低温保存方法可分为两类， 冷冻诱导保护性脱水的超低温保存 玻璃化处理的超低温保存。 1、冷冻前材料的预处理：目的是材料适应将遇到的低温，提高分裂细胞比例，降低自由水含量，以防大冰晶形成。 2、添加冷冻防护剂(cryoprotective agent，CPA) ： 渗透型冰冻保护剂：多属低分子中性物质，在溶液中易结合水分子，发生水合作用，使溶液粘性增加，从而弱化了水的结晶过程，达到保护目的。如：甘油、DMSO、乙二醇（EG）、乙酰胺、丙二醇（PG）等。 非渗透型冰冻保护剂：能溶于水，但不能进入细胞，它使溶液呈过冷状态，可在特定温度下降低溶质（电解质）浓度，从而起到保护作用。如：聚乙烯吡咯烷酮（PVP）、蔗糖（sucrose）、葡聚糖、PEG、白蛋白、羟乙基淀粉。 3、冷冻方法： ①慢冻法 ②快冻法 ③分步冷冻法 ④干冻法 ⑤滴冻法 4、解冻：速溶。30-400C温水浴溶解。 5、解冻后的处理： 6、生活力测定及重新培养 （二）、玻璃化保存方法 玻璃化（vitrification）是指液体转变为非晶体（玻璃态）的固化