新专题2土壤中尿素的细菌的分离和计数分析.pptxVIP

专题2微生物的培养和应用合肥八中宋晖内容纲要2.1微生物的实验室培养2.2土壤中分解尿素的细菌的分离与计数2.3分解纤维素的微生物的分离课题背景尿素[CO(NH2)2]——重要的农业氮肥。只能被土壤中细菌分解为NH3才能被植物吸收利用CO(NH2)2+H2O CO2+2NH3课题目的：分离产生脲酶的细菌（1）自然界中目的菌株筛选的依据是根据它对的要求，到相应的环境中去寻找。（2）实验室中微生物筛选的原理： 人为提供有利于生长的条件(包括营养、温度、pH等)，同时或其他微生物生长。生存环境目的菌株抑制阻止（一）筛选菌株研究思路提出的问题—如何寻找耐高温的酶？选择培养基：允许特定种类的微生物生长，同时抑制或阻止其他种类微生物生长的培养基。菌株：纯且活状态所保存的菌种。研究思路（一）筛选菌株研究思路 KH2PO41.4gNaHPO42.1gMgSO4H2O0.2g葡萄糖10.0g尿素1.0g琼脂15.0g将上述物质溶解后，用蒸馏水定容到1000mL。该培养基的配方中，为微生物的生长提供碳源和氮源的分别是什么物质？此配方能否筛选出产生脲酶的细菌？为什么？碳源：葡萄糖、尿素氮源：尿素能。只有产生脲酶的细菌能利用尿素作为氮源而生存。以尿素唯一氮源（二）统计菌落数目：1、活体计数法（稀释涂布平板）（1）操作方法：稀释涂布平板→统计菌落数（2）原理：1个菌落→1个活菌研究思路（二）统计菌落数目：1、活体计数法（稀释涂布平板）（3）统计原则①选30∼300个菌落的平板统计②每个稀释度取3个平板取其平均值为什么？研究思路例：两位同学用稀释涂布平板法测定同一土壤样品中的细菌数。从对应稀释倍数为106的培养基中，得到以下两种统计结果。1、甲同学在该浓度下涂布了一个平板，统计的菌落数为230。2、乙同学在该浓度下涂布了A、B、C三个平板，统计的菌落数分别为21、212、256，该同学以这三个平板上菌落数的平均值163作为统计结果。你认为这两位同学的作法正确吗？如果有问题，错在哪？研究思路甲：没有重复实验（至少涂布3个平板）乙：A组结果误差过大，不应用于计算平均值研究思路（4）统计结果：统计的菌落数往往比活菌的实际数目低，因此统计结果一般用菌落数表示。每克样品中的菌株数=（C/V)*MC:某一稀释度下平板上生长的平均菌落数；V:所用稀释液的体积；M:稀释倍数。为什么？2、显微镜直接计数研究思路研究思路利用选择培养基进行尿素分解菌的分离过程中，从对应稀释倍数为106的培养基中，A、B两同学分别得到以下两种统计结果。1、A同学筛选出150个菌落。2、B同学筛选出50个菌落。B认为A的培养基被杂菌污染了，或培养基中混入了其他含氮物质，因而导致不能分解尿素的细菌也能在该培养基中生长。A确认自己的操作无误，但也拿不出能令人信服的证据。请你帮助A同学改进实验，提供具有说明了的证据。研究思路设置对照—同等条件下，培养空白培养基（三）设置对照1、设置对照的目的：排除实验组中非测试因素对实验结果的影响，提高实验结果的可信度。对照实验是指除了被测试的条件外，其他条件都相同的实验。满足该条件的称为对照组，未满足该条件的称为实验组。实验过程（一）土壤取样 1、天然培养基和合成培养基：2、土壤取样：（1）取样的位置：土壤，天然培养基，含有大量的微生物，其中70∼90％是细菌。在富含有机质的土壤层的3∼8cm处中分布着绝大多数的细菌。（2）取样要求：铲去表层土。实验过程（二）样品稀释（1）测细菌数：一般用104、105、106稀释液（2）测放线菌：一般用103、104、105稀释液（3）测真菌数：一般用102、103、104稀释液原则：确保平板上的菌落数在30∼300之间。　　（三）微生物的培养与观察1、接种：用适当的稀释液作涂布平板2、培养：细菌：30∼37℃，1∼2d;放线菌:25∼28℃,5∼7d;霉菌:25∼28℃,3∼4d.3、观察：a.每24h统计一次菌落数目b.以“稳定菌落”为观察对象实验过程（四）鉴定：筛选后必鉴定鉴别培养基：不影响微生物的生存酚红培养基：鉴定分解尿素的细菌。原理：脲酶催化尿素分解成氨→培养基碱性增强→酚红变红→脲酶阳性实验过程(1)作样品系列稀释液(2)用适当的稀释液涂布平板实验过程在一定的培养条件下（相同的培养基、温度及培养时间），同种微生物表现出相同而稳定的菌落特征。实验过程内容现象结论有无杂菌污染的判断对照的培养皿中无菌落生长未被杂菌污染培养物中菌落数偏高被杂菌污染菌落形态多样，菌落数偏高培养物中混入其他杂菌选择培养基的筛选作用牛肉膏培养基上的菌落数目大于选择培养基上的数目选择培养基具有筛选作用样品的稀释操作得到三个或三个以上菌落数目在30～300的平板操作成功重复组的结果若选取同一种土样，统计结果应接近结果分析与评价特别提示　(1)不同