3第三章生物制品的制备要点.ppt

第三章 生物制品的制备 Preparation of biopreparate 第一节 一般生物制品的制备方法  (Preparation of general bio-preparate ) 一、生物制品原料的选择、预处理与保存方法 （Selection、pretreatment and preservation of raw material of biopreparate） （1）原料选择 原料的选择原则： ①有效成分含量高，新鲜； ②原料来源丰富，产地较近； ③原料中杂质含量少； ④原料成本低等。 原料的选择注意事项： ①植物原料生长的季节性； ②微生物原料的对数期； ③动物原料的年龄与性别。 （2）原料的预处理与保存： ①动物原料：采集后要立即处理，去除结缔组织、脂肪组织等，并迅速冷冻贮存。 ②植物原料：要择时采集并就地去除无用的部分，保鲜处理； ③微生物原料：要及时将菌体细胞与培养液分开，进行保鲜处理。 原料的保存方法主要有： ①冷冻法。该方法适用于所有生物原料。常用-40℃速冻。 ②有机溶剂脱水法。常用的有机溶剂是丙酮。该法适用于原料少而价值高、有机溶剂对活性物质没有破坏作用的原料，如脑垂体等。 ③防腐剂保鲜。常用乙醇、苯酚等。该法适用于液体原料，如发酵液、提取液等。 二、生物制品的提取（extraction） (1)生物组织与细胞的破碎（smash of tissue and cell）：生物制品大部分存在于生物组织或细胞中，要提高提取率，破碎过程是非常重要的。常用的破碎方法： ①，该法属于机械破碎方法，设备有组织捣碎机、胶体磨、匀浆器、匀质机、球磨机、乳钵等。 ②压力法，有加压与减压两种，常用的法兰西压釜、细菌压等使用效果良好。 ③反复冻融(freeze thawing)法，设备简便，活性保持好，但用时较长。 ④超声波振荡破碎(ultrasonic oscillation crash)法，该方法破碎效果较好，但由于局部发热，对活性有损失。 ⑤自溶法(autolyze method)或酶解法(enzymolysis method)，用得较少。 （2）提取（extraction） 生物组织与细胞破碎后要立即进行提取。提取时，首先要根据活性物质的性质， ①选择提取试剂。提取试剂主要有：水、缓冲溶液、盐溶液、乙醇、其他有机溶剂（如氯仿、丙酮等）。 ②考虑提取溶剂的用量及提取次数、提取时间。 ③注意提取的温度、pH、变性剂等因素。 三、蛋白质类制品的分离纯化方法 （Separation and depuration of protein production） 包括蛋白质、多肽和酶类等药物。分离纯化方法有： (1)沉淀法（precipitation）：蛋白质、酶的初步纯化往往用沉淀法。原理是使蛋白质胶体颗粒破坏，从而沉淀蛋白质。常用的有盐析法（salting out）、有机溶剂沉淀法（organic solvent precipitation）、等电点沉淀法（isoelectric precipitation）、与靶物质结合沉淀法（如抗体—抗原）（target banding precipitation）等。 (2) 按分子大小分离的方法：有超滤法（ultrafiltration）和透析法（dialysis）（即膜分离方法）、凝胶层析法（gel chromatography）、超速离心法（ultra centrifugation）等。其中膜分离法可用于生物大分子物质的浓缩、分级和脱盐。 (3)按分子所带电荷进行分离的方法 氨基酸、多肽、蛋白质、酶均为两性电解质。它们具有等电点(pI)，在离开等电点的pH时便会带正或负电荷。例如某蛋白质等电点为7.0，当溶液pH为4.0时，分子则带有正电荷。由于具有该性质，利用带电性质进行分离是极其有效的方法。利用电学性质进行分离的方法有离子交换柱层析法（ion-exchange chromatography）、电泳法（electrophoresis）、等电聚焦法（isoelectric focusing）等。 （4）亲和层析法（affinity chromatography） 大部分生物活性物质都有其作用的靶物质，如酶与底物(Substrate)（或抑制剂(inhabitor)）、抗原与抗体、激素(hormone)与受体(receptor)等，它们之间有特异的亲合作用，利用该性质设计的特异层析分离技术称为亲和层析。 亲和层析分离专一性强，操作