HiScan操作手册要点.docxVIP

制备MSA1需要MA1（-20℃,illumina）MA2（-20℃,illumina）MSM（-20℃,illumina）0.1M NaOH（4℃）96孔深孔板DNA样品（50ng/ul）准备将置于扩增后区的Hybridization Oven温度调至37℃；给一个新的MIDI plate贴上条形码标签；在室温下融化MA1，MA2，MSM，颠倒混匀后短暂离心；将DNA样品融化至室温；实验每个MSA1平板的样品孔中加入20μl MA1溶液；每个样品孔加入4μl DNA样品；每个样品孔加入4μl 0.1N NaOH；用cap mat封闭MSA1平板；用vortexer 1600rpm振荡MSA1平板1min；280g离心1min；室温下静置10min；每个样品孔加入68μl MA2；每个样品孔加入75μl MSM；用cap mat封闭MSA1平板；用vortexer 1600rpm振荡MSA1平板1min；280g离心1min；转入扩增后区域操作，将MSA1平板放在37℃的Hybridization Oven里20~24hr；片段化MSA1需要FMS（-20℃,illumina）Heat block准备将Heat block调至37℃预热；室温下融化FMS，轻微颠倒混匀，短暂离心；从Hybridization Oven里取出MSA1平板；实验50g离心MSA1平板1min；每个样品孔加入50μl FMS溶液；用cap mat封闭MSA1平板；用vortexer 1600rpm振荡MSA1平板1min；22℃下50g离心MSA1平板1min；将MSA1平板置于37℃ Heat block 1hr；沉淀MSA1需要PM1（4℃保存,illumina）100% 异丙醇（2-propanol）Heat block准备将Heat block调至37℃预热；室温下融化PM1去掉MSA1平板的cap mat实验每个样品孔加入100μl PM1；用cap mat封闭MSA1平板；用vortexer 1600rpm振荡MSA1平板1min；将MSA1平板置于37℃ Heat block 5min；22℃下50g离心MSA1平板1min；将离心机温度设为4℃；每个样品孔加入300μl异丙醇；用cap mat封闭MSA1平板，上下轻微颠倒平板十次；将MSA1平板放置在4℃下30min；如果即将进入重悬MSA1步骤，现在可以取出RA1放在室温下解冻（RA1不易解冻，解冻后含有少量沉淀，需要摇匀溶解）；4℃下3000g离心MSA1平板20min（离心机只能达到2200g，将离心时间延长至30min），迅速取出MSA1平板，可见样品孔中有蓝色沉淀；迅速进入下一步骤，避免沉淀重悬；弃掉cap mat迅速弃掉样品孔中溶液，可以用手瞬间甩出样品孔里的溶液，再将MSA1平板连续多次倒扣于吸水纸上，直至样品孔中没有溶液流出为止；将没有封口的MSA1平板保持倒置，放于试管架上，在室温下干燥1hr；可见样品孔底部蓝色沉淀；进入下一步实验，或者用cap mat封闭平板，保存在-20℃；重悬MSA1需要RA1（-20℃保存,illumina）Heat sealer准备将Hybridization Oven温度调至48℃预热；打开heat sealer预热，大约需要20min；室温下融解RA1，颠倒使沉淀溶解；实验每个样品孔加入46μl RA1；用foil heat seal封闭MSA1平板，将foil heat seal压在MSA1平板上，置于heat sealer中，用sealing block紧紧压在foil heat seal上持续5sec，再将MSA1平板水平旋转180°，再次用sealing block紧紧压住持续5sec，迅速进入下一步骤；取出MSA1平板，快速用工具压过整个MSA1平板表面，使每一个样品孔表面都有少许凹陷，确定样品孔完全密封；若平板表面温度在密封好之前已经下降，可以用sealing block再一次加热；将密封好的MSA1平板放在Hybridization Oven里48℃反应1hr；用vortexer 1800rpm振荡MSA1平板1min；280g短暂离心；如果MSA1平板之前保存在-20℃，可以重复振荡和离心步骤直至沉淀完全悬浮；进入下一步实验（可在室温下短暂保存）或者在-20℃保存（超过24hr保存需放置在-80℃）；芯片杂交需要PB2（室温,illumina）BeadChipsHyb ChambersHyb Chamber lidHyb Chamber gasketsHyb Chamber inserts准备将Heat block调至95℃预热；将Hybridization Oven温度调至48℃预热速度调至5；实验将Hyb Cham