第十一章经典液相色谱法与检测技术要点.pptVIP

1 第十一章 经典液相色谱法与检测技术 ◆学习目的⊙ ◆知识要求⊙ ◆能力要求⊙ ◆学习目的 2 通过学习色谱法基本概念、基本类型、分离机制以及各种经典液相色谱法的固定相、流动相及其选择等相关知识。 了解色谱法的特点及其应用，会利用吸附色谱、分配色谱等经典柱色谱法和薄层色谱法对试样进行分离分析。为气相色谱法和高效液相色谱法的学习奠定基础，同时也为学习药物分析、天然药物化学、药物分离检测技术等专业课程奠定基础。 ◆知识要求 3 1.掌握色谱法的基本概念，吸附色谱法和分配色谱法的分离机制，薄层色谱法的基本原理及其应用。 2.熟悉色谱法的分类，离子交换色谱法和凝胶色谱法的分离机制，各种经典的柱色谱法基本原理及其应用。 3.了解色谱法的由来和发展。 ⊙ ◆能力要求 熟练掌握薄层色谱法、柱色谱法的操作技术，学会应用薄层色谱法等对物质进行分离和鉴定。 4 ⊙ 案例导入 为什么采用这种方法可以使得这些性质相似的物质得以分离？固定相（布或纸片）和不断加入的溶液对组分的分离起到什么作用，两者如何选择？分离后的各组分怎样定性和准确检出……？ 5 古罗马时代人们将一滴含有混合色素的溶液滴到一块布(或纸片)上，随着溶液的扩展，在布（或纸片）上会呈现一个一个的同心圆环，人们通过观察这些同心圆环的差异来分析染料和色素。 第一节概 述 色谱法（chromatography）是一种根据物质的物理或物理化学性质不同而进行分离分析的方法。 6 色谱法和其他方法相比较具有下列特点： 1. 分离效能高 2. 灵敏度高 3. 应用范围 色谱法——起源 真正意义的色谱实验 色谱法的创始人是俄国植物学家Tsweet。 一、色谱法产生与发展 流动相 固定相 被分离后，代表了不同组分的色带 色谱柱 第一节 概 述 色谱法——发展 柱色谱—20世纪初； 趋势：新型固定相和检测器及各种检测技术的联用 薄层、纸色谱—20世纪30～40年代； 气相色谱—20世纪50～60年代； 高效液相色谱—20世纪70年代； 第一节概 述 第一节概 述 （一）按两相的分子聚集状态分类 9 色谱总称 流动相 固定相 色谱名称 液相色谱法 （LC） 液体 固体 液—固色谱法（LSC） 液体 液—液色谱法（LLC） 化学键合相 化学键合相色谱法（BPC） 气相色谱法 （GC） 气体 固体 气—固色谱法（GSC） 液体 气—液色谱法（GLC） 超临界流体色谱法（SFC） 超临界流体 固体或化学键合相 二、色谱法的分类 第一节概 述 10 （二）按操作形式分类 色谱名称 柱色谱（CC） 平面色谱 填充柱色谱法 毛细管柱色谱法 薄层色谱法（TLC） 纸色谱法（PC） 固定相形式 填充柱 毛细管柱 薄层板 纸 在玻璃或金属管内填充或涂覆满固定相 在弹性石英或玻璃毛细管内壁覆有吸附剂薄层或固定液 在玻璃或金属板上涂布吸附剂等固定相 具有多孔和强渗透能力的滤纸或纤维素薄膜 色谱过程 流动相由柱头向柱尾不间断冲洗 流动相从板或纸的一端向另一端扩展 二、色谱法的分类 第一节概 述 第一节概 述 11 （三）按色谱过程的分离机制分类 吸附色谱法（AC） 分配色谱法（DC） 离子交换色谱法（IEC） 凝胶色谱法（SEC） …… 二、色谱法的分类 色谱法分类小结 12 13 课堂互动 请您阐述色谱法的分类方法，及各种色谱法的特点？ 第一节概 述 第一节概 述 第一节概 述 （一）分配系数和容量因子 1. 分配系数（K） 14 2. 容量因子（k） 三、色谱法的基本原理 第一节概 述 第一节概 述 15 3. 分配系数与容量因子的关系 称为相比，在一定色谱条件下为定值； Vm 为柱中流动相体积（近似等于第十二章中提及的死体积）；Vs 是柱中固定相（或固定液）的体积；κ值随β 和K 的变化而变化。 （一）分配系数和容量因子 第一节概 述 分配系数（或容量因子）越小，组分的迁移速度越快，保留时间越短，即先流出色谱柱；反之亦然。 分配系数（或容量因子）不等是组分分离的前提。 16 4.分配系数、容量因子与保留值的关系 第一节概 述 （一）分配系数和容量因子 （二）色谱过程的分离机制 组分不断被吸附、解吸附，如此反复多次的过程。 组分的吸附平衡常数越大，越容易被吸附，迁移速度就越慢。 吸附平衡常数 17 图11-2 吸附色谱分离机制示意图 1. 吸附色谱法分离机制 第一节概 述 （二）色谱过程的分离机制 18 流动相携带样品流经固定相时，各组分在两相间不断地进行溶解、萃取，再溶解、再萃取的过程 分配系数大的组分移动速度慢，分配系数小的组分移动速度快。 2.分配色谱法分离机制 图11-3 分配色谱分离机制示意图 第一节概 述 （二）色谱