发酵液的预处理要点.pptVIP

发酵液（或培养液）的预处理 预处理和固液分离的目的： 1、分离细胞、菌体和其它悬浮颗粒(细胞碎片、核酸和蛋白质的沉淀物)。 2、除去部分可溶性杂质。 3、改变滤液的物理性质（降低粘度等），以利于后继操作。 总策略： 1、胞外产物：应尽可能转移到液相中，常用调pH至酸性或碱性的方法来达到。 2、胞内产物：首先收集细胞、破壁，生化物质释放到液相，再分离细胞碎片。 3、通常，以含生化物质的液相为出发点，进行后继操作。 一、发酵液的预处理 1、改变液体物理性质，促进固液分离。 细菌及某些放线菌菌体细小，发酵液粘度大，不能直接过滤，由于菌体自溶，核酸、蛋白质及其它有机粘性物质的存在会造成滤液浑浊，滤速极慢，因此，在预处理中应采用絮凝或凝聚的方法，设法增大悬浮液中固体粒子的大小，提高其沉降速度，或采用稀释、加热等方法降低粘度，以利于过滤。 必要性： 2、发酵液杂质很多，其中影响最大的是高价无机离子和杂蛋白，预处理时，应尽量除去。 高价无机离子危害： 在采用离子交换法提炼时，影响树脂的交换容量。 杂蛋白质的危害： 离子交换法和大网格树脂吸附法提炼时，会降低吸附能力， 萃取时，易产生乳化。 过滤或膜过滤时，使滤速下降，膜受到污染。 （一）、凝聚和絮凝 凝聚：在中性盐电解质作用下，破坏胶体粒子的分散状态使之聚集的过程。 絮凝：指在某些高分子絮凝剂存在下，在悬浮粒子之间产生架桥作用，使胶粒形成粗大的絮凝团的过程。 基本概念： 凝聚和絮凝技术能有效地改变细胞、菌体和蛋白质等胶体粒子的分散状态，使聚集起来，增大体积，以便于过滤。 常用于菌体细小而且粘度大的发酵液的预处理。 一般来说，反离子的价数越高，该值就越小，即凝聚能力越强。 阳离子对带负电荷的胶粒凝聚能力的次序： 常用的凝聚剂电解质有： Al(OH)3 、Fe3O4、Ca(OH)2、石灰等 有机高分子聚合物絮凝剂具有长链线状结构，是水溶性聚合物，分子量高达数万至一千万以上，在长的链节上含有相当多的活性功能团，可以带有多价电荷，也可以不带电性。 它们通过静电引力、范德华分子引力或氢键的作用，强烈地吸附在胶粒的表面，一个高分子聚合物的许多链节分别吸附在不同颗粒的表面上，产生架桥联接，生成粗大的絮团，这就是絮凝作用。 2、絮凝作用 聚丙烯酰胺类衍生物 聚苯乙烯类衍生物 无机高分子聚合物絮凝剂，如聚合铝盐和聚合铁盐等。 天然有机高分子絮凝剂：多聚糖类胶粘物，海藻酸钠，明胶、骨胶、壳多糖和脱乙酰壳多糖等。 絮凝剂 根据活性基团在水中解离情况不同，可分为非离子型、阴离子型(含有羧基)和阳离子型(含有胺基)三类。 优点：用量少，—般以ppm计，絮凝体粗大，分离效果好，絮凝速度快、种类多，适用范围广。 缺点：存在一定的毒性，特别是阳离子型聚丙烯酰胺。 近年来还发展了聚丙烯酸类阴离子聚凝剂，它们无毒，可用于食品和医药工业中。 聚丙烯酰胺类絮凝剂： 非离子型和阴离子型高分子絮凝剂，主要通过分子间引力和氢键产生吸附架桥，常与无机电解质凝聚剂搭配使用。 首先加入无机电解质，使悬浮粒子脱稳而凝聚，然后，再加入絮凝剂。凝聚作用为絮凝剂的架桥创造了良好的条件，从而，提高了絮凝效果。 这种包括凝聚和絮凝机理的过程，常称为混凝。 混凝： 絮凝剂浓度（用量） 絮凝剂分子量 絮凝剂类型 溶液的pH 搅拌速度和时间 助凝剂 影响絮凝效果的因素： （二）、杂蛋白的去除方法 蛋白质等电点多在pH 4.0-5.5，此时溶解度最小。但单靠等电点法不能将大部分蛋白质除去。 1、等电点法： 2、变性法： 变性蛋白质溶解度较小。最常用方法是加热。 只适于热稳定的物质。 大幅度改变pH，加酒精、丙酮等有机溶剂或表面活性剂等。 在酸性溶液中，蛋白质能与一些阴离子如三氯乙酸盐、水杨酸盐、钨酸盐、苦味酸盐、蹂酸盐、过氯酸盐等形成沉淀。 在碱性溶液，蛋白质能与一些阳离子，如Ag+，Cu2+，Zn2+，Fe3+和Pb2+等形成沉淀。 应用举例： 1、链霉素发酵液，调至酸性(pH 3.0)，加热至70℃，维持l／2h，能去除蛋白质，使过滤速度增大10一100倍，滤液粘度可降低1/6。 2、柠檬酸发酵液，加热至80℃以上，使蛋白质变性凝固，降低发酵液粘度，大大提高过滤速度。 举例： 1、四环类抗生素生产中，采用黄血盐和硫酸锌的协同作