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实验四 X染色质、人类染色体G显带标本的制备及观察 一、实验目的 学习X染色质的标本制作。 观察X染色质、形态特点。 了解人类染色体G显带技术方法 二、实验原理 在间期，女性体细胞中两条X染色体中的一条异染色质化。用Giemsa染色法可使其着色，本方法的优点是只有细胞核清晰着色，胞浆不着色，因此细胞核背景清晰，利于对位于核膜边缘的X染色质的辨认。 Giemsa染料是由噻嗪和曙红组成的，着色时DNA 先与2个噻嗪分子结合，然后再与一个曙红分子结合，形成沉淀物，而DNA的某些部位对染料不敏感，由此形成明暗相间的条带。 G显带的方法很多，最常用的是将已固定的染色体制片进行预处理，再用Giemsa染色。预处理的方法非常多，可用热、碱、各种蛋白酶、尿素等，其中最常用的是胰蛋白酶进行预处理。方法简便，周期短。 G显带区的DNA有较丰富的A-T对，有相当一部分中度重复序列DNA可能在G带区，Giemsa染料在G带区的结合与其相应的DNA 和非组蛋白有关。 三、实验方法与步骤 1, 制备： G-带胰酶消化法 外周血培养常规法制作染色体标本，置60℃烘箱烘8h～10h，或80℃烘3h，然后置37℃烘箱烘3d 左右即可予处理。 置0.02% 胰蛋白酶溶液入染色缸，加入0.4%酚红2滴，并以3%三羟甲基氨基甲烷液调节pH为 6.4～6.6，37℃水浴。 将烤三天的玻片从37℃烘箱取出，投入0.02% 胰蛋白酶溶液中，并不断摆动，2.5min 左右。 取出自来水冲洗。 染色：Giemsa染液（pH7.4 磷酸缓冲液 5ml + Giemsa原液 11滴（毛细滴管）染色8～10min，流水冲洗。 空气干燥、镜检。 注意事项 首先取决于染色体本身的质量，染色体要较长，以早中期为宜，且中期相丰富、分散好，无胞浆背景。 片龄不宜太长。时间越长，细胞对胰酶处理的抵抗性越强，片龄过长的标本染色后会导致斑点状而非带纹。 胰酶温度和处理时间需控制好，一般胰酶处理时间不少于30S 2，X染色质制备 标本制作与染色 取材: 口腔粘膜上皮涂片。 玻片晾干后置入固定液(甲醇：冰醋酸 3:1)中10min。 晾干，置入5mol/L HCl中，室温下水解20min。 在新鲜的蒸馏水中涮洗四次，以充分去HCl，以免影响染色液的pH。 Giemsa染液中染色约5min。 先后用蒸馏水冲洗，晾干。 观察 四、实验结果 * *
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