第2章细胞生物学技术概念.pptVIP

（三）植　物　细　胞　培　养 外植体培养：诱导产生愈伤组织。研究植物的生长发育、分化和变异；无性繁殖；制取代谢产物。 悬浮细胞培养：产业化大规模细胞培养，制取植物代谢产物。 （三）植　物　细　胞　培　养 原生质体培养：培养脱壁后的细胞。 特点： 比较容易摄取外来的遗传物质，如DNA； 便于进行细胞融合，形成杂交细胞； 细胞壁可再生，经诱导分化成完整植株。 单倍体培养：通过花药或花粉培养可获得单倍体植株。 Plant Cell Culture Animal Cell Culture 二、细胞融合 通过培养和介导，两个或多个细胞合并成一个双核或多核细胞的过程称为细胞融合（cell fusion）或细胞杂交。 同核体：相同基因型的细胞融合而成。 异核体：不同基因型的细胞融合而成。 二 细　胞　工　程 细胞融合（cell fusion） 自发融合：同种细胞在培养过程中自发合并的现象。 诱发融合：异种间的细胞必须经诱导剂处理才能融合。 诱导细胞融合的方法：生物方法（仙台病毒、副流感病毒和新城鸡瘟病毒 ）、化学方法（聚乙二醇PEG）、物理方法（电击和激光）。 纯化的原生质体图示 完整洋葱原生质体（40×） 完整烟草原生质体（40×） 植物细胞融合 PEG法原生质体的融合 植物细胞融合 细胞融合抗盐碱耐干旱水稻新品种 细胞融合抗盐碱耐干旱小麦新品种 山东大学生命科学学院 研制，含有高冰草的染色体小片段和叶绿体DNA 。 单克隆抗体技术：正常淋巴细胞（如小鼠脾细胞）具有分泌抗体的能力，但不能长期培养，瘤细胞（如骨髓瘤）可以在体外长期培养，但不分泌抗体。于是英国人Kohler和Milstein 1975将两种细胞杂交而创立了单克隆抗体技术，获1984年诺贝尔奖。 超薄切片技术 2）负染技术 用重金属盐(如磷钨酸)对铺展在载网上的样品染色。 吸去染料，干燥后，样品凹陷处铺了一层重金属盐，而凸出的地方没有染料沉积，从而出现负染效果。 分辨率可达1.5nm左右。 Negative Stained Actin 主要电镜制样技术 3）冰冻蚀刻 freeze-etching 标本置于干冰或液氮中冰冻，然后断开。升温后，冰升华，暴露出了断面结构。 向断裂面上喷涂一层蒸汽碳和铂。然后将组织溶掉，把碳和铂的膜剥下来，此膜即为复膜（replica）。 A Yeast Cell 主要电镜制样技术 20世纪60年代问世，用来观察标本表面结构。 （二）扫描电子显微镜 工作原理：是用一束极细的电子束扫描样品，在样品表面激发出次级电子，次级电子的多少与样品表面结构有关，次级电子由探测器收集，信号经放大用来调制荧光屏上电子束的强度，显示出与电子束同步的扫描图像。 为了使标本表面发射出次级电子，标本在固定、脱水后，要喷涂上一层重金属膜，重金属在电子束的轰击下发出次级电子信号。 扫描电子显微镜原理 人类红细胞 酵母 人类精子 （三）扫描隧道显微镜scanning tunneling microscope，STM 原理：根据隧道效应而设计，当原子尺度的针尖在不到一个纳米的高度上扫描样品时，此处电子云重叠，外加一电压（2mV~2V），针尖与样品之间形成隧道电流。电流强度与针尖和样品间的距离有函数关系，将扫描过程中电流的变化转换为图像，即可显示出原子水平的凹凸形态。 分辨率：横向为0.1~0.2nm，纵向可达0.001nm。 用途：三态（固态、液态和气态）物质均可进行观察。 扫描隧道显微镜原理 一、离心技术 分离细胞器（如细胞核、线粒体、高尔基体）及各种大分子基本手段。 高速离心机:转速为10~25kr/min。 超速离心机:转速25kr/min。 第二节 细胞组分的分析方法 （一）差速离心 Differential centrifugation 特点： 介质密度均一； 速度由低向高，逐级离心。 用途：分离大小相差悬殊的细胞和细胞器。 沉降顺序 细胞核——线粒体——溶酶体、过氧化物酶体——微体、高尔基体、囊泡——核蛋白体。 细胞器初步分离后，再通过密度梯度离心纯化。 （一）差速离心 Differential centrifugation （二）密度梯度离心 用介质在离心管内形成一连续或不连续的密度梯度，将细胞混悬液或匀浆置于介质的顶部，通过离心力场的作用使细胞分层、分离。 类型：速度沉降、等密度沉降。 常用介质：氯化铯、蔗糖、多聚蔗糖。 1、速度沉降 velocity sedimentation 用途：分离密度相近而大小不等的细胞或细胞器。 特点：介质密度较低。 原理：介质密度梯度平缓，分离物按各自的沉降系数以不同的速度沉降。 2.等密度沉降 isopycnic sedimentation 用途：分离密度不等的颗粒。 特点： 介质密度较