2DNA的复制程序.ppt

1953年Watson和Crick在提出DNA双螺旋结构的那篇划时代的论文中，作者指出，“我们没有忽视从我们提出的特异性碱基配对可以立即提出遗传物质复制的一种可能机制”。几周以后，Watson和Crick提出了DNA复制的半保留机制，并于1958年得到Meselson和Stahl的同位素实验证实。经过几十年的研究，DNA复制的过程，参与复制过程的酶和蛋白质及其作用机制已基本清楚，但有关的一些细节，和DNA复制的调控，有待进一步深入研究。探索DNA复制的详细机制及其调控，显然是一项非常有吸引力的工作。这一领域的进展，对于我们深入理解遗传物质的传递模式，控制生物体的生长过程，控制肿瘤和艾滋病等严重疾病，均有重要意义。 DNA复制的概况 DNA复制(replication)是指亲本DNA双螺旋解开，两条链分别作为模板，合成子代DNA分子的过程。不论是原核生物还是真核生物，在细胞增殖周期的一定阶段，DNA将发生精确的复制。随即细胞分裂，并以染色体为单位，将复制好的DNA分配到两个子细胞中。染色体外的遗传物质如质粒和噬菌体，以及线粒体和叶绿体DNA也有基本相似的复制过程，但它们的复制受到染色体DNA复制的控制。 DNA复制过程的研究一般采用三类系统：一是ΦX174 DNA或质粒DNA及其完成复制所必需的酶、蛋白质及其因子构成的体外系统。二是以E.coli为模式生物，研究原核生物的复制。三是以酵母和动物病毒为模式生物，研究真核生物的DNA复制。由于真核生物的复杂性，有关真核生物DNA复制，仍有很多问题有待深入研究。 2.3.2 复制子、复制的起点、方向 复制子(replicon):基因组中能独立进行复制的单位称为复制子。 复制起点（origin）、复制终点（terminus） 复制方式：双向、单向 单复制子、多复制子 复制子、复制的起点、方向 基因组中能独立进行复制的单位称复制子(replicon) ，在每个细胞周期中，每个复制子只复制一次。原核细胞基因组、质粒、许多噬菌体、某些病毒的DNA及真核生物的细胞器DNA，一般由单个复制子构成。复制时，从一个固定的起点(origin)开始复制，此时双链DNA解开形成两条单链，分别作为模板进行复制，由此形成的结构很像叉子，被形象地称作复制叉(replication fork)。复制的方向大多是双向的，并形成含有两个复制叉的复制泡或复制眼(replication eye)。少数是单向复制的，只形成一个复制叉。 2.3.3复制的几种主要方式 1.线状DNA分子双链的复制 线形DNA环化后复制- λDNA 连环分子-T4噬菌体DNA DNA末端产生发夹结构-草履虫线性mtDNA 特定蛋白参与复制（不需要引物）-腺病毒DNA D环复制 DNA复制起始中的主要步骤a. 大约20个左右的DnaA蛋白首先与OriC中的4个9碱基重复区相结合；b. 识别并使3个13碱基串联重复区DNA形成开环结构；c. DnaB蛋白在DnaC的帮助下与未解链序列结合。每六个DnaB蛋白形成一组并与一条DNA母链结合，可在不同方向同时起始DNA的复制。当细胞中存在足够的SSB和DNA gyrase时，DnaB的解链效率非常高。 ??? 整个DNA复制过程中，只有复制起始受细胞周期的严格调控。 ??? Once in each cell cycle。 2.4.3 DNA子链的延伸 ??? 主要包括两个不同但相互有联系的事件，即前导链和滞后链的合成。由DNA helicase解开双螺旋，由拓朴异构酶消除DNA链上的扭曲力，SSB结合使DNA单链稳定。 ??? 前导链的合成：由DnaG（primase）在复制起始位点附近合成一个10-60 nt的RNA引物，然后由polⅢ把dNTP加到该引物上。??? 滞后链的合成：产生Okazaki fragments，消除RNA引物并由DNA pol I补上这一小段DNA序列，由DNA Ligase把两个片段相连。 2.5 真核生物 DNA 的复制 d. 不同的发育时期，真核的复制起始点和复制子的大小会变化。 真核生物DNA聚合酶及有关蛋白 （2）端粒酶： 首先在四膜虫中发现 端粒酶：特殊的反转录酶，由蛋白质和RNA组成。 端粒酶以自身携带的150bp的RNA为模板，在随从链模板DNA的3′OH末端延长DNA，再以这种延长的DNA为模板，继续合成随从链。 Greider和Blackburn (1989)， 1）端粒酶与端粒DNA结合，端粒酶中的RNA与凸出的3’引物配对； 2）以RNA为模板，在3’端上从头合成六个Nt ； 3）合成一个重复单位后，端粒酶向DNA模板新合成的3’移动，引物再和模板配对，就这样循环