上海交通大学遗传学果蝇实验方案第四组.pptxVIP

果蝇杂交实验方案 小组成员：张振洋 王婷 危莹 梁靖聆 1.实验目的 1.实验目的 1.验证基因伴性遗传的规律 2.验证基因连锁与交换规律并计算重组值 2.实验材料 2.实验材料 2.1黑腹果蝇，Drosophila melanogaster 2.2黑腹果蝇生活史 生长迅速。10-12天左右就可完成一个世代， 25℃培养, 卵1-2天，幼虫4-5天，蛹4-5天，成虫可活26-33天 。 2.3黑腹果蝇的饲养方法 果蝇以酵母菌为主要食料，凡能发酵的基质都可做为果蝇饲料。实验室里主要用玉米。 原种每2-4周换一次培养基，看到幼虫后就将成虫赶去。各品系之间避免杂交。 2.4研究的性状及显隐性 伴性遗传： 眼色-----红眼（+），白眼（w） 连锁与交换：眼色-----红眼（+），白眼（w）； 翅型-----长翅（+），小翅（w）； 刚毛-----正常刚毛（+），卷刚毛（sn） 3.实验技术流程 3.实验技术流程 4.实验步骤 4.实验步骤 准备饲养瓶 麻醉 转瓶 4.1 .1准备饲养瓶 2.饲养瓶的制备： 饲料瓶使用中型指管，用纸和橡皮筋作为瓶塞。先将培养瓶消毒，而后再装饲料（每瓶2厘米厚即可），待饲料冷却后，用酒精棉花擦瓶的内壁，然后插入消毒过的吸水纸，作幼虫化蛹时的干燥场所。 水（毫升） 琼脂（克） 蔗糖（克） 玉米粉（克） 酵母粉（克） 丙酸（毫升） 玉米饲料 200 1.5 13 17 1.4 1 1 玉米饲料的配制步骤： ①取100ml水，加入琼脂，煮沸，使充分溶解，加糖，煮沸溶解。 ②再取100ml水混合玉米粉，加热，调成糊状。 ③将上述两者混合，煮沸。以上操作都要搅拌，以免沉积物烧焦。 ④待稍冷后加入酵母粉及丙酸，充分调匀，分装，按附表用量配制，可得饲料200ml左右。 按照下表制作培养基 4.1.2麻醉 4.1.3转瓶 用乙醚麻醉，使果蝇处于昏迷状态。使用时将乙醚（2-3滴）滴到麻醉瓶的棉花球上。先将长有果蝇的培养瓶在海绵垫上敲，使果蝇全部震落在培养瓶底部，然后迅速打开培养瓶的棉塞，把果蝇倒入去盖的麻醉瓶中，并立即盖好麻醉瓶，待果蝇全部麻醉后，倒在白瓷板上。 将培养瓶横卧，然后用毛笔将麻醉的果蝇从白瓷板上轻轻扫入，待果蝇清醒过来后再把培养瓶竖起，以防果蝇粘在饲料上。原种每2-4周换一次培养基（依温度而定，10-15℃约4周换一次，20-25℃约二周换一次）。 4.2 杂交1 （1）亲本处女蝇的挑选 1. 亲代培养： 第一天，将两个品系的雌雄果蝇麻醉后进行挑选，其中在野生型（红眼）中挑出3—4对，突变型（白眼）中挑出7—8对，分别培养，25℃培养8天。 2. 挑选处女果蝇 第八天，待培养瓶中出现蛹并且呈黑色时，将两个品系的亲代果蝇麻醉弃去。到第12小时，麻醉孵化出的突变型成蝇，分出雌蝇，至另一个培养瓶，培养处女蝇待用。每隔12小时挑选一次，将挑出的处女蝇放到处女蝇的培养瓶中，直至得到10只处女蝇。 （2）雄性果蝇的挑选 麻醉野生型品系，挑出10只雄果蝇。 （3）果蝇杂交 把挑出的10只雄果蝇放入突变处女蝇培养瓶中，杂交，25℃培。 （4）F1代生长情况的观察 上述杂交果蝇培养8天以后，将亲代果蝇麻醉弃去。观察新长出的子一代果蝇性状，并记录。 （5）F1代性状的观察记录及统计 4.3杂交2 1.杂交亲本的挑选与转瓶 从F1培养瓶中收集30对果蝇（不必再挑处女蝇），转移到3个新的培养瓶中，每瓶10对，25℃继续培养。 2.F2代生长情况的观察 8天以后，麻醉F1果蝇，弃去。新生长的果蝇是F2果蝇，观察性状并记录。 3.F2代性状的观察记录及统计 4.4实验注意事项 1.果蝇杂交试验的关键在于挑选处女蝇，由蛹孵化为成虫后，12小时内不会交配，在此时间内挑选的雌蝇是没有交配的处女蝇，超过计划12小时，培养瓶内的雌蝇可能已经交配。所以，一定要严格掌握确定的处女蝇。 2.培养瓶和培养基要保持干燥，避免麻醉后的果蝇被水滴粘住无法动弹。 3.培养瓶封口要封紧，纸要紧贴着瓶子，以防果蝇爬到缝隙中 5.实验结果及分析 5.1 伴性遗传实验结果 P ♀ XwXw（白眼） × ♂ X+Y（红眼） ↓ F1 ♀ X+Xw（红眼） × ♂ XwY（白眼） ↓ 1/2 1/2 F2 ♀X+Xw（红