GCSF含量测定法.docVIP

附录XXX 重组人粒细胞刺激因子含量测定 色谱条件 用蛋白质与多肽分析用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；柱温为30℃±5℃，供试品保存温度4℃±0.5℃；以0.1%三氟乙酸的水溶液为流动相A液，以0.1%三氟乙酸的乙腈溶液为流动相B液，流速为1ml/分钟，检测波长214nm，按下表进行梯度洗脱。 编号 时间 （分钟） A% B% 1 0.00 60 40 2 40.00 20 80 3 45.00 0 100 4 50.00 60 40 5 60.00 60 40 检查法 取1支标准品，按使用说明书复溶。根据供试品标示的蛋白含量、装量计算其蛋白浓度，将复溶后的标准品、供试品用20mmol/L醋酸-醋酸钠缓冲液（pH4.0）稀释至相同蛋白浓度。将供试品溶液和标准品溶液以相同进样体积分别注入液相色谱仪，进样量约为6μg。梯度洗脱，记录色谱图谱。标准品溶液、供试品溶液均进样3次。按下式计算： 重组人粒细胞集落刺激因子含量（g/ml） CR×AX×nR÷AR÷nx CR为标准品溶液的含量，g/ml; AX为供试品溶液的平均峰面积； AR为标准品溶液的平均峰面积； nR为标准品溶液的稀释倍数； nX 为供试品溶液的稀释倍数。