毒性试验1研讨.pptVIP

目录 实验方法 原理 1 2 毒性试验的原理 Part 1 体外毒性试验是 应用灌注的器官、培养的组织切片、细胞（或亚细胞成分），在体外进行的毒理试验。 提供一些适当的数据和资料，以便确定有关化合物的毒理学性质，为社会需要的外源化合物的安全使用作出判断。 作用 什么是体外毒性试验？ 目的 用于外来化合物的毒性筛选和毒作用机理的研究。 用来测定毒性物质短期内对细胞或DNA的潜在危害或损伤。 提供生物反应如细胞死亡、染色体突变或损伤等的定性定量的结果。 可用来评定试验对象对人体潜在影响的体外试验系统。 体外毒性试验的基本原理是所观察到的毒理学效应均是毒物和/或反应活性代谢产物对敏感性细胞或敏感细胞内某靶分子作用的结果。 如将敏感细胞或某靶分子例如酶，在体外条件下，维持其正常的生理功能，并观察外源化合物对其的影响，即毒理学中毒物中毒的启动阶段（在体外条件下，观察其对外源化合物的反应和外源化合物对它的作用）。 体外试验模型取材范围很广，可取哺乳动物的离体脏器灌流、脏器切片温育、细胞培养、亚细胞组分以及提纯的某些酶分子或DNA分子等。 体外毒性试验的原理 体外到体内外推的问题； 体外毒性试验难以预测慢性毒性。 易于控制环境因素； 较为快速和经济； 可以利用人体细胞； 减少整体动物的使用； 试验间的误差较少； …… 体外毒性试验的优缺点 优点 缺点 体外毒性试验主要集中在对外源化合物的细胞毒性和遗传毒性测试两个方面。 细胞毒性测试 主要研究外源化合物对受试细胞的细胞存活、细胞增殖、细胞氧化应激反应、活化代谢及细胞膜结构的损伤等的影响。化合物的细胞毒性能够预示着其诱发炎症的潜能。 遗传毒性测试 主要研究外源化合物对受试细胞的DNA、染色体等遗传物质的损伤及致突变、致畸变得影响。化合物的遗传毒性提示其诱发癌症的可能性。 体外毒性试验的分类 实验方法 Part 2 体外毒性试验——细胞毒性测试 MTT法 XTT法 台盼蓝排斥试验 中性红 比色法 酸性磷酸酶 活性 LDH释放法 …… 正常的活细胞，细胞膜结构完整，能够排斥台盼蓝，使之不能进入胞内。 在连续培养中的正常的步入动物细胞会不断分裂和增殖，加入细胞毒性化合物将会抑制细胞的分裂，导致细胞数减少。中性红是一种弱阳离子活性染料，能在活细胞的溶酶体中积累，当细胞表面或溶酶体膜的敏感性发生改变时将导致中性红的摄取下降。 原理：活细胞线粒体中的琥珀酸脱氢酶能使外源性MTT（噻唑蓝）还原为水不溶性的蓝紫色结晶甲瓒并沉积在细胞中，二甲基亚砜能溶解细胞中的甲瓒，用酶联免疫检测仪测定其光吸收值，可间接反映活细胞数量。 体外毒性试验——遗传毒性测试 Ames试验 微核试验 染色体畸变分析 小鼠淋巴瘤细胞突变试验 姐妹染色单体交换试验 程序外DNA合成试验 单细胞凝胶电泳试验 原理：鼠伤寒沙门菌突变型菌株在无组氨酸的培养基上不能生长，在有组氨酸的培养基上可以正常生长，但在无组氨酸的培养基中有致突变物存在时，则沙门菌突变型可恢复突变为野生型，在无组氨酸培养基上也能生长。 当细胞受到染色体断裂剂作用或纺锤体毒物作用时，主核没有形成，代之以一组小核。 断裂的DNA片段比大片段DNA迁移的更快，电泳后出现彗星状，即为DNA损伤。 通过加入标记DNA合成原料，观察是否有程序外DNA合成。 细胞毒性测试——MTT法 原理： 活细胞线粒体中的琥珀酸脱氢酶能使外源性MTT（噻唑蓝）还原为水不溶性的蓝紫色结晶甲瓒并沉积在细胞中，二甲基亚砜能溶解细胞中的甲瓒，用酶联免疫检测仪测定其光吸收值，可间接反映活细胞数量。 优点：灵敏度高、经济、简便、快速、无放射污染、临床相关性高、易标准化 缺点：准确性不确定、结果易受影响、细胞毒性较大