2.2.1动物细胞培养与核移植技术(新).pptVIP

动物细胞融合 单克隆抗体技术 动物细胞核移植 动物细胞培养 动物细胞工程常用技术 （基础） 在治疗烧伤病人时，通常采用的方法是取烧伤病人健康皮肤进行自体移植。但对于一个大面积烧伤的病人来说，自体健康皮肤非常有限，使用他人皮肤来源不足，而且会产生免疫排斥反应。 动物细胞培养技术 那么，怎么才能获得大量的自体健康皮肤呢？ 1、概念： 就是从动物机体中取出相关的组织，将它分散成单个细胞，然后放在适宜的培养基中，让这些细胞生长和增殖。 2、原理：细胞增殖 （有丝分裂） 概念：人们通常将动物组织消化后的初次培养称为原代培养。 胰蛋白酶/胶原蛋白酶处理 取出组织块 胚胎或幼龄动物器官组织 剪碎 单个细胞 细胞悬液 ①原代培养 细胞悬液 CO2培养箱 增殖能力强，分裂旺盛，分化程度低，容易培养 3.过程 加培养液 特点： ①细胞贴壁生长，长成单层细胞； ②有接触抑制现象； 转入培养瓶内进行原代培养 贴壁过程 细胞贴壁： 培养瓶或培养皿壁要求： 内表面光滑、无毒、无菌、易于贴附 在培养瓶悬液中分散培养的细胞很快就贴附在瓶壁上，称为细胞贴壁。 ①原代培养特点 当贴壁细胞分裂生长到表面相互接触时,细胞就会停止分裂增殖，这种现象称为细胞的接触抑制。 细胞的接触抑制 ①原代培养特点 接触抑制： ②传代培养（扩大培养） CO2培养箱 当原代培养的细胞处于接触抑制后, 用胰蛋白酶处理,使细胞从瓶壁上脱离下来,然后加入新的培养液,将细胞分离稀释,并从原培养瓶内转接到新的培养瓶内,这个过程称传代培养.（分瓶培养的过程） 分瓶扩大培养： 以1:2或l:3以上的比率进行分装 10—50代细胞 无限传代 分瓶 胰蛋白酶 原代培养接触抑制 1—10代细胞 传代培养 单层细胞 细胞核型保持正常 多层细胞 细胞突变核型改变 ①第 一次危机 ②第 二次危机 部分细胞核型可能改变 癌细胞（不死性，无限增殖，失去接触抑制，易转移） ②传代培养特点 单层细胞 每分瓶扩大培养一次为一次传代；传代代数就是分瓶次数； 每一代的细胞培养，从细胞贴壁到贴满瓶壁过程中，细胞分裂了很多次； 思考题 传代培养中,传代代/次数与细胞增殖/分裂次数是否相同？ 1.为何动物细胞培养过程将组织分散成单个细胞的呢？ 成块的组织细胞靠在一起,彼此限制了细胞的生长和增殖，也不利于细胞营养物质的吸收和代谢废物的排出。 思考题 2.胰蛋白酶的作用是什么呢？由此可说明细胞间的物质是什么成份？能够用胃蛋白酶代替胰蛋白酶吗？为什么？胰蛋白酶真的不会把细胞消化掉吗？ ①胰蛋白酶水解蛋白质 ②细胞间的成分是蛋白质 ③不能，因为两者的最适pH不同 ④胰蛋白酶长时间的作用也会消化细胞膜蛋白，因此必须控制好胰蛋白酶的处理时间。 4.传代培养的细胞能一直传代下去吗？ 5.有些为何能一直传下去？ 不都能。传代培养到50代左右的时候，大部分的细胞都停止分裂，最终衰老死亡；但有少数细胞能够继续传代。 这些发生突变，获得不死性，朝着癌细胞方向发展（成为了癌变细胞） 3.如果培养的细胞数量并未达到人们的需求，应该怎样办？ 用胰蛋白酶处理将贴满瓶壁的细胞分离下来，然后分瓶后继续培养（传代培养） 8.动物细胞培养能否像植物组织培养那样最终培养出新个体？ 不能，动物细胞培养只能使细胞数目增多，不能形成新的动物个体 7.动物细胞培养就是为了得到这些细胞吗？ 可以得到细胞，也可以得到细胞产物 6.人类一般保存的是哪类细胞呢？为什么？ 保存10代以内的细胞，可以保持细胞正常的二倍体核型；而10代以后的细胞核型可能发生变化，有少部分还发生突变向癌细胞方向发展 4.动物细胞培养条件 1.无菌、无毒的环境 ①对培养液和培养用具进行无菌处理； ②在培养液中添加一定量的抗生素； ③定期更换培养液； 2.营养 葡萄糖、氨基酸、无机盐、促生长因子、微量元素等 + 动物血清或血浆 3.温度和pH 温度36.5±0.5度，pH7.2～7.4 4.气体环境 95%空气和5% CO2（CO2培养箱提供） 合成培养基 不能用胃蛋白酶代替胰蛋白酶 O2是细胞代谢所必需的； CO2维持培养液的pH 获得细胞 细胞的全能性 细胞或细胞产品 新的个体或细胞产品 培养结果 或细胞产物 快速繁殖、培育无病毒植株等 培养目的 蔗糖、植物激素 培养基特有成分 液体培养基 固体培养基 培养基性质 细胞增殖 原 理 动物细胞培养 植物组织培养 比较项目 植物组织培养和动物细胞培养的比较 葡萄糖等、 动物血清 5.动物细胞培养技术的应用: 1.生产生物制品 如病毒疫苗、干扰素、单克隆抗体 2.应用于基因工程 主要用于作为受体细胞 3.检测有毒物质，判断某种物质的毒性 4.细胞的生理、药理、病理研究 如用于筛选抗癌药物