原代细胞培养实验(2010-2011-2).pptVIP

原代细胞培养实验 费晓芳 掌握无菌操作技术。 了解小鼠解剖操作技术。 了解原代细胞培养的一般方法与步骤。 了解培养细胞的消化分散。 了解细胞计数方法。 了解倒置显微镜的使用。 实验原理： 原代细胞培养 是将机体内的某组织取出，分散成单细胞，在人工条件下培养使其生存并不断生长、繁殖的方法。借助这种方法可以观察细胞的分裂繁殖、细胞的接触抑制、以及细胞的衰老，死亡等生命现象。 实验内容： 动物的选择： 选择大约一半足孕时间的胚胎，10－13天龄胚胎含有最大数量的未分化的间质细胞，成纤维细胞可从这些细胞衍生获得。 每组小鼠胚胎2-5个 实验材料： 每组的超净台中有以下物品： 1. 50ml 配制好的RPMI1640培养液1瓶；8ml小牛血清（FCS) 1瓶；100ml 0.25%胰蛋白酶 1瓶；PBS(-)1 瓶 2. 100ml灭菌烧杯2个； 3、50ml离心筒2个 4、灭菌培养皿1个，细胞培养瓶1个 4、1ml ，200μl移液器各1支；枪头盒2个；无菌玻璃搅拌棒1个 5、细胞计数板1块； 6、灭好菌的镊子1把，剪刀1把； 7、酒精灯1台； 试验操作步骤： 1)胚胎的分离。适用哺乳动物(仓鼠、小鼠和大鼠) a．采用认可的方案处死啮齿动物。 b．立即在无菌超净台内用70％乙醇擦洗整个动物。 c．用无菌