基因工程2答题.docVIP

第四章 核酸的定量和纯度检测 提取的总DNA、RNA或载体DNA，外源目的DNA片段，必须对其浓度、纯度、构型、分子量大小等基本情况进行了解，以下几种方法从不同角度对DNA或RNA进行了鉴定。 紫外光谱分析法 核酸的最大吸收波长为260 nm，蛋白质为280 nm，在260nm波长时，用标准样品测得每毫升l微克DNA钠盐溶液的吸光度值为0.02，即在1 OD值相当于双链DNA浓度为50 ug/ml，单链DNA或RNA为40 ug/ml，单链寡聚核苷酸的含量为30 ug/ml，可以据此来计算核酸样品的浓度。 DNA浓度计算：根据经验数据，若OD260=l时，dsDNA的浓度为50微克/毫升，假如质粒样品pBR322稀释500倍，测得光吸收值为0.025，则该样品pBR322浓度为50*0.025*500=625微克/毫升。 分光光度法不但能确定核酸的浓度，还可通过测定在260nm和280nm的OD值的比值（OD260/OD280）估计核酸的纯度。纯净DNA的比值为1.8，纯净RNA的比值为2.0。若DNA的比值高于1.8，说明DNA样品中的RNA尚未除尽，若样品中含有酚和蛋白质将导致比值降低，此时，可通过苯酚-氯仿-异戊醇方法抽提后再检测，以排除蛋白质的影响。270nm存在高吸收表明有酚的干扰。 优点：使用UⅤ-240紫外分光光度计测定DNA的方法简便、快速。 注意的