大肠杆菌海藻糖的代与调控研究进展.doc20115082.docVIP

大肠杆菌海藻糖的代谢与调控研究进展 申屠俊杰 （生命科学学院 生物工程2班 摘要 ：海藻糖( Trehalose) 是化学性质稳定的非还原性二糖, 由2 个吡喃葡萄糖分子通过- 1, 1- 糖苷键连接而成, 海藻糖独特的物理特性使其在细胞中可起到稳定生物大分子的作用, 因而在化妆品、医药和食品等工业领域中有极好的应用前景。海藻糖是一种重要的抗逆物质。大肠杆菌中otsBA 操纵子编码的两种酶负责海藻糖合成。细胞的周质海藻糖酶( t re A ) 将外源海藻糖分解成两个葡萄糖分子。尽管大肠杆菌中渗透压诱导合成的海藻糖并不能保护细胞抗干燥, 我们将otsA 单个基因通过农杆菌转入烟草时, 转基因株提高了耐盐和抗干燥特性, 同时在转基因烟草提取物中检测到海藻糖, 证明otsA 基因在烟草中表达并合成海藻糖。我们认为若将otsA 基因转入其它植物, 可望改善这些植物的抗干旱、耐盐碱特性和延长采摘后的保鲜期。 关键词 海藻糖代谢 大肠杆菌 抗逆 转基因植物 海藻糖在生物圈内无处不在, 是由2 个葡萄糖分子通过??1-1 糖苷键相连的二糖, 因而无还原性, 它的特殊分子结构使其有别于其他糖类, 其独特的物理特性,如高亲水性、化学稳定性、形成非吸湿性玻璃体及不形成分子内氢键, 使其作为细胞应激代谢物, 在不同的环境胁迫中保护生物大分子[ 1- 3] 。海藻糖在工业中有极好的应用前景, 如在干燥和冷冻期间可维持细胞膜的完整性; 增加多种不稳定物质的稳定性; 提高冷冻细胞的生存能力、提高生物物质如酶、疫苗等的稳定性; 在食品和制药工业中作为冷冻保护剂和高效保存剂。科学家正设法: 11 从微生物细胞中提取制备海藻糖, 外加至以上产品中, 干燥保护其活性; 21 分离有关海藻糖合成酶基因, 应用生物工程手段引入植物, 提高植物的抗干旱、盐碱能力, 培育优良农作物品种。 大肠杆菌( Escherichia coli , E . col i ) 作为原核生物的模型, 八十年代后期科学家们对它进行了广泛深入的研究, 其海藻糖的代谢途径及其调控是所有生物中了解得最清楚的[ 8) 11] 。此外, 由于E . col i在遭受外界环境胁迫渗透压升高时, 它们采取了有 别于嗜盐古细胞而类似于真核生物的渗透调节机制, 即通过体内合成积累小分子有机物质, 包括谷氨酸、脯氨酸、氨基酸衍生物和海藻糖等来对抗外界渗透压力, 维持细胞正常生理功能。鉴于E . col i 在渗透压调节的生理和遗传机制上与真核生物相似, 因此通过分离纯化真细菌耐渗基因, 采用植物基因工程技术可望创造出耐旱、耐盐碱的农作物新品种。本文结合本实验室工作和最新研究进展, 对E . coli中海藻糖合成基因的代谢调控及其应用作一介绍。 1 海藻糖的合成代谢 在高渗透压环境时, E . col i 及其它真细菌积累K+ 和合成甜菜碱、氨基酸和糖等有机渗调物[ 12 ) 14] , 这些渗调物通过相应的转运系统, 如kdp和tr k 基因编码的K+ 转运系统、p roU 基因编码的甜菜碱转运系统、p roP 基因编码的脯氨酸转运系统等, 传递到细胞质中以平衡细胞内外的渗透压强度。p roU 和bet 体系和合成取决于外界渗透压胁迫,p roU 的合成还受细胞内浓度的调节。用1H 和13C核磁共振仪分析表明, E . col i 只有当生长在葡萄糖-无机盐培养基中并经渗透压胁迫时, 细胞诱导合成海藻糖和少量的谷氨酸[ 15] 。一旦细胞积累了甜菜碱, 就不再累积海藻糖。但甘氨酸甜菜碱只能保护细胞抗高渗透压, 而海藻糖则不仅限于此, 它所能提供的抗逆保护范围更宽 E. col i 中由渗透压胁迫引起的海藻糖合成途径与动物和酵母的相同, 即以葡萄糖和6-磷酸葡萄糖为底物经6-磷酸海藻糖合成酶催化生成6-磷酸海藻糖, 再经6-磷酸海藻糖酯酶脱磷酸后形成海藻糖。Giaver 等[ 9] 分离了不能在含0145M NaCl 基础培养基上生长的E. coli 插入突变体, 并对其进行克隆和突变分析。结果表明, 由于otsA 或otsB 基因的突变导致了这些菌株的生长缺陷。otsA 基因编码6-磷酸海藻糖合成酶, otsB 编码6-磷酸海藻糖磷酸酯酶, otsBA 基因构成一个操纵子, ot sB 基因离启动子较近, otsA 离启动子较远。Kaasen 等[ 4] 将ots-BA 基因定位于E . coli 染色体图42min( 1992kb) [ 18]处, 参照DNA 序列分析数据库, otsB 基因正好位于araH 基因下游。otsB 编码区3c-端与ostA 编码区5c-端有23 个碱基的重叠, ot sA