烟草蚀纹病毒蛋白酶说明书.docVIP

TEV Protease 产品概述 TEV Protease 烟草蚀纹病毒蛋白酶；Tobacco etch virus protease 是来源于烟草蚀纹病毒 TEV Nla的重组蛋白酶，此蛋白酶被用来切除纯化后融合蛋白的亲和标签。TEV蛋白酶具有很强的位点特异性，能够识别EXXYXQ G/S 的七氨基酸序列 Glu-Asn-Leu- Tyr-Phe- Gln-Gly ，最普通的是ENLYFQG，其切割位点在谷氨酰胺和甘氨酸或丝氨酸之间。该酶在PH 5.5-8.5和4-30℃的广泛范围内皆有活性，使得反应条件的选择可根据目的蛋白的情况而修改。该酶带有His-sumo Tag经6×His标签纯化，剪切反应完毕后可通过Ni-NTA（产品货号：PAN001）去除。本蛋白酶来源于大肠杆菌重组表达。 酶活性单位定义 在1X TEV Buffer 50 mM Tris-HCl, pH8.0, 0.5 mMEDTA, 1mM DTT 中，30℃条件下反应 1 小时，能够切割 3 μg 的反应底物达 85%以上所需的酶量定义为一个活性单位。 产品溶液组分 TEV protease储存液 10X Cleavage Buffer 25 mM Tris-HCl，pH 8.0 500 mM Tris-HCl，pH 8.0 150 mM NaCl 5 mM EDTA 1 mM EDTA 10 mM DTT 5 mM DTT 50%（V / V）Glycerin 推荐反应体系 反应物组成 体积 融合蛋白 50 μg TEV Protease 2 μl（10 U/μl） 10X TEV Buffer 10 μl ddH2O 至100 μl 不同温度下的参考反应时间： 4℃反应 16 小时 20℃反应 6 小时 30℃反应 2 小时 活性测试 待测融合蛋白100μg，加入TEV protease 2μl，4℃反应 16 小时，取酶切前后样品SDS检测，如右图所示 90% 融合蛋白被切割。 储存条件 长期储存于-80℃，可保存 2 年；或小量分装后保存于-20℃，可保存6 个月，避免反复冻融。10X TEV Buffer 置于-20℃保存。 包装规格 货号 规格 RPP002-100 100 U RPP002-500 500 U RPP002-2000 2000 U