基因工程疫苗摘要.pptVIP

基因工程疫苗 基因重组示意图 基因工程疫苗=F1？ 传统疫苗（第一代疫苗） 通过改变培养条件或在不同寄生动物上传代使致病微生物毒性减弱（减毒），或通过物理化学方法将其灭活来完成。 第一节 基因工程亚单位疫苗 基因工程亚单位疫苗（genetic engineering subunit vaccine）??基因工程亚单位疫苗是用DNA重组技术，将编码病原微生物保护性抗原的基因导入受体菌（如大肠杆菌）或细胞，使其在受体细胞中高效表达，分泌保护性抗原肽链。提取保护性抗原肽链，加入佐剂即制成基因工程亚单位疫苗。 技术关键：选择合适的抗原基因和表达载体 一、抗原基因的选择 抗原：单一蛋白质抗原， 基因：对于稳定抗原，一般选择病原体表面糖蛋白基因； 对于易变异抗原（流感，HIV,HCV),选择各亚型共有的核心蛋白的保护性抗原基因序列； 表面抗原+核心抗原（HBV）：重组两种以上抗原 二、表达系统 亚单位疫苗表达系统：大肠杆菌、枯草杆菌、酵母、昆虫细胞、哺乳动物细胞、转基因植物、转基因动物。 选择原则：免疫原性、表达效率、产物纯化难易纯度。 举例：乙肝表面抗原在酵母、哺乳动物细胞（CHO)有效表达，大肠杆菌不能表达。 大肠杆菌表达载体 最常用 方式：将外源基因接在大肠杆菌启动子下游－单纯表达目的基因产物；免疫原性 表达融合蛋白：保留转录和翻译的起始信号，细菌基因和外源基因融合表达～杂交肽。以利于鉴定和纯化 酵母表达载体： 属于低等真核细胞，常用来表达糖基化抗原 代表：酵母表达乙肝表面抗原疫苗 临床试验证明安全有效，已替代了血源乙肝疫苗 缺点：免疫效果较差（与完整病毒颗粒比） 改善措施 调整基因组合：表达成颗粒结构——免疫原性增强；如将甲肝病毒整个编码区插入痘苗病毒载体中 在体外将抗原聚合，再以脂质体或微囊包裹——增加免疫原性 加入佐剂：氢氧化铝 第二节 基因工程载体疫苗 以微生物作载体，将保护性抗原重组到微生物体内，将微生物连同保护性抗原一同制成疫苗——载体疫苗（vectored vacine) 多为活疫苗 优点：用量少，不需纯化，在接种者体内繁殖产生保护性抗原－特异性免疫应答，载体防护佐剂效应； 目前用于重组疫苗生产的特定疫苗株有： 腺病毒（adenovirus，Ad）载体； 痘苗病毒载体； 脊髓灰质炎病毒（polio）载体； 单细胞疱疹病毒（herpes simplex virus，HSV）载体； 麻疹病毒（measles virus，MV）载体； 霍乱弧菌； 沙门氏菌； BCG。 一、以细菌为载体的基因工程疫苗 减毒沙门氏菌载体 为最主要和用途最广载体，诱导粘膜免疫反应 沙门氏菌（Salmonella sp.)为肠道致病菌 美国FDA批准以Ty21a减毒活疫苗为标准株 特征：galE基因缺失，Vi抗原（－），LPS合成能力下降 应用：痢疾杆菌O抗原质粒转化Ty21a，大肠杆菌不耐热肠毒素（LT），结核抗原、乙肝、流感、血吸虫等。 问题：外源基因表达产物降解，质粒丢失等 卡介苗载体(BCG）：诱导细胞为主的免疫反应。具分枝杆菌和大肠杆菌复制子(oriM,ColEori),链霉素抗性基因,多克隆酶切位点,转录终止密码,hsp60,hsp70启动子. 动物试验显示出疗效. 人临床试验I,II期不理想. 二、以病毒为载体的基因工程疫苗 病毒减毒活疫苗和亚单位蛋白质疫苗的结合。 1）避免亚单位疫苗需要佐剂和多次注射的缺点 2）诱导全面持久的免疫应答 代表：痘苗病毒、腺病毒、脊髓灰质炎病毒、单纯疱疹病毒。 病毒基本结构 痘病毒载体 特点: 使用成果200年，安全可靠； 感染细胞种类多； 容纳大分子外源基因插入； 高水平表达外源基因产物； 耐热、高效价培养。 痘苗病毒载体已表达抗原 狂犬病毒 肝炎病毒 疱疹病毒 CMV EB病毒 流感、副流感 麻疹、登革热 日本脑炎 HIV 肿瘤抗原－肿瘤疫苗 腺病毒载体 易培养 DNA拷贝数高 高效启动子 外源基因长达7000bp 多个血清型，重复注射避免抑制作用 第三节 核酸疫苗 基因疫苗 DNA直接肌肉注射 属核酸，制剂为核酸本身 直接刺激免疫系统 第四节 基因缺失活疫苗 活疫苗是最有效的疫苗，但可引起轻度病症 潜在的毒力返祖 基因缺失活疫苗：去除致病性毒力基因 代表： 兽用伪狂犬病疫苗、霍乱活菌疫苗 第六节 转基因植物疫苗 了解 * * 第二代疫苗：利用DNA重组技术，克隆并表达保护性抗原基因，利用表达的抗原产物或重组体本身制成的疫苗。 包括：基因工程亚单位疫苗，基因工程载体疫苗，核酸疫苗，基因缺失活疫苗，蛋白质工程疫苗。 Recombinant DNA expression purified 牛分支杆菌F Mycobacterium bo