中药化学苷类-2.ppt

第5节 苷的提取、分离及检识 苷的提取： 溶剂法 苷的分离： 大孔树脂法 色谱法 苷的检识： 化学检识 色谱检识 1.苷的提取 溶剂法：用极性由小到大的溶剂依次提取。常用溶剂有沸水、甲(乙)醇、正丁醇、乙酸乙酯等。 ！注意：苷的水解（酸、酶、碱的影响）。 原生苷的提取：破坏或抑制酶的活性。 药材迅速干燥 拌料无机盐如碳酸钙 用沸水、高浓度醇提取 次生苷或苷元的提取：利用酶活性。 发酵后或水解后，用亲脂性有机溶剂提取。 2.苷的分离纯化 溶剂处理法：利用溶解度差异分离。提取液浓缩后，用合适的溶剂处理，根据苷类与杂质的溶解度不同分离。如乙醚、丙酮沉淀皂苷等。 铅盐沉淀法：利用醋酸铅在水或稀醇中能沉淀某类成分的性质，进行除杂或提纯。中性醋酸铅能沉淀具邻二酚OH、-COOH的酸性苷；碱式醋酸铅能沉淀酚性成分。 色谱法：利用混合物中各组分与固定相和流动相的相互之间的作用不同，使各组分以不同程度分布在固定相和流动相中，当流动相流过固定相时，各组分以不同的速度移动，达到分离。分离效果好，是一种实验室常规分离方法。 按流动相分：液相色谱（liquid chromatography） 气相色谱（gas chromatography） 按操作方式分：薄层色谱 纸色谱 柱色谱 按分离机理分：吸附色谱 分配色谱 离子交换色谱 按极性分：正相色谱 反相色谱 2.苷的分离纯化 大孔树脂吸附色谱 原理：大孔树脂是一类具有多孔结构、不溶于水的固体高分子物质，可以通过物理吸附（范德华力）从水溶液中有选择的吸附成分，达到分离目的。 特点：选择性、机械强度高、再生处理方便、吸附速度快等。应用广泛，如苷与糖类的分离等。 分类：非极性、中极性、极性和强极性四类。选择的树脂极性与被分离物质极性既不能相似（吸附过强），也不能差太大（无法分离）。常用的有DA-101、DA-201、AB-8型等。 操作：样品用水溶解，上样后依次用水、含水醇、浓醇洗脱。收集洗脱液，回收溶剂，浓缩干燥，即得。 聚酰胺色谱 凝胶色谱 2.苷的分离纯化 硅胶、氧化铝吸附色谱：适用于极性低的苷类或苷元的分离。利用被分离组分与吸附剂之间的相互作用（可逆的范德华力）差异进行分离。在洗脱过程中，柱内不断地发生解吸、吸附，再解吸、再吸附的过程。即被吸附的物质被溶剂解吸而随溶剂向下移动，又遇到新的吸附剂颗粒被再吸附，后面流下的溶剂又再解吸而使其下移动。经过一段时间以后，该物质会向下移动一定距离。此距离的长短与吸附剂对该物质的吸附力以及溶剂对该物质的解吸(溶解)能力有关。不同的物质由于吸附力和解吸力不同 ，移动速度也不同。吸附力弱而解吸力强的物质，移动速度就较快。 分配色谱：以硅胶、纤维素等为支持剂，水饱和的溶剂为流动相进行分离，适用于极性较大的苷类成分。常用反相色谱，即以键合硅胶为固定相，含水的溶剂系统为流动相分离。 3.苷的检识 化学检识 Molish反应（α-萘酚浓硫酸）：糖、苷（＋）紫色环。 糖被氧化成糠醛，糖醛与酚胺缩合生成有色化合物。 Fehling或Tollen反应：还原糖（＋）。 苷、非还原糖(-)。比较水解前后结果，判断是糖还是苷。 RCHO+2Ag(NH3)2+OH－→RCOONH4+2Ag↓+3NH3+H2O RCHO+2Cu(OH)2+NaOH→RCOONa+Cu2O↓+3H2O 第6节 苷的结构研究 纯度鉴定 分子式的测定 苷的水解 苷元的结构鉴定 糖的结构鉴定 糖的结构鉴定 糖的种类 糖的数目 糖链的结构 位置：苷元-糖、糖-糖 顺序：糖-糖 构型：苷键 1.糖的种类的确定 色谱法—测定水解液中的单糖，与对照品比较。 PC：最常用。 TLC：点样量较少≤5μg。可用无机盐（强碱弱酸）的水溶液制板，增加样品承载量，改善分离效果。如0.3mol/L Na2HPO4、0.03mol/L H3BO3等。 HPLC：直接进样，但灵敏度不及GC。 GC：灵敏度高，但需水解、制备衍生物。 NMR法—直接测定苷，与标准品的糖数据比较。 1HNMR、13CNMR 二维NMR 2.糖的数目的确定 MS法 测定苷和苷元分子量，根据差值或碎片质荷比差值计算。 色谱法—测定水解液中的单糖 TLC-Scan、HPLC-定量，以单糖对照品为标准。 NMR法 1HNMR：根据糖端基质子信号数目确