生物质制氢光合细菌连续培养技术实验应用研究.docVIP

生物质制氢的光合细菌连续培养技术实验研究 摘 要：为了解决规模化光合细菌生物制氢工艺中，生产菌种连续培养的问题，系统地测定了光合细菌混合菌群的生长曲线，根据标准曲线计算出不同初始 OD660值的培养液中光合细菌的倍增周期，结合光合细菌连续制氢工艺对生产菌种的基本要求和工程实际，设计了一套培养液部分循环连续培养实验装置，试运行实验结果显示：在初始菌液 OD660值为0.273、厌氧、（30±1）℃、1200 Lux 连续光照、培养周期 38 h 的条件下，部分循环连续培养的出口菌液 OD660值可控制在 0.38～0.74，符合光合制氢对生产菌种的要求。 关键词：光合细菌；制氢；生物质；连续培养；倍增周期；部分循环 0 引 言 氢能作为未来的重要清洁能源，将为解决中国能源 安全、环境污染和社会经济的可持续发展问题发挥重要 作用。生物制氢是利用微生物转化生物质产生氢气的一 类制氢方法。与传统的热化学方法相比，生物制氢具有 节能、原料可再生、生产条件温和（中性、30℃左右） 且环境友好等突出的优势，在氢气生产技术研究领域中 的地位越来越显著 [1, 2, 12] 。目前，世界上，包括中国在内 的许多国家和组织，投入大量的人力和物力，进行生物 制氢技术的研究开发 [3] 。 以光合细菌直接利用太阳能，在温和的条件下处理 富含生物质的有机废水（粪便污水、农产加工废水等）， 在获取氢气的同时减轻了环境污染程度，应用前景广阔， 受到国家和科学界的大力支持 [4, 5] 。近几年，光合细菌直 接利用太阳能制氢技术研究，得到了国家 863 计划、国 家自然科学基金等项目的支持，相关技术研究已经取得 了一定的突破，目前，项目研究进入了中小规模的生产 性技术研究阶段，主要目标是解决光合生物的连续、高 效和规模化制氢工艺问题，其中，生产菌种的连续、稳 定供应则是整个生产工艺中的关键环节。截止目前，国 内外关于微生物连续培养技术的研究和应用已有不少报 收稿日期：2007-08-10 修订日期：2007-12-16 基金项目：国家自然科学基金项目；国家高技术研究发展计划 （863 计划）项目（2006AA05Z119）；教育部博士点专项科研基金项目 （20060466001） 作者简介：师玉忠（1965－），男，副教授，博士生，主要从事农业生物环 境与能源工程领域的研究工作。郑州市文化路 95 号 河南农业大学机电工 程学院，450002。Email: syz6511@126.com ※通讯作者：张全国（1958－），男，博士，院长、教授、博士生导师，河 南省可再生能源学会理事长，主要从事农业生物环境与能源工程领域的研究 工作。郑州市文化路 95 号 河南农业大学机电工程学院，450002。 Email: zquanguo@163.com 道，但有关光合细菌的报道却极少，并且集中在“恒化 法”和“恒浊法”两种比较传统的连续培养方法上，这 两种方法均为向培养液中注加新鲜培养基而使培养液发 生溢流达到连续培养的目的 [8,15,16] ，由于这类方法存在一 些难于克服的缺陷，在生产中的应用受到了限制。 本文就生产菌种的连续培养技术进行了较为深入的 实验研究，以期解决连续制氢工艺的光合细菌菌种连续、 稳定培养问题，为规模化、连续化制氢提供技术支撑。 1 实验材料与方法 1.1 实验材料 1.1.1 菌种 采用由本实验室选育出来的7种优势光合产氢菌株， 经过混合培养形成的混合菌群 [5,14] 。 1.1.2 培养基 蒸馏水 10000 mL；KH 2 PO 4 15 g；(NH 4 ) 2 SO 4 5 g；NaCl 2 g；MgSO 4 2 g；CaCl 2 0.5 g；K 2 HPO 4 6 g；乙酸钠 30 g； 酵母膏 2 g；微量元素 1 mL；生长因子 10 mL [5,6,11,12] 。根 据培养基用量按比例配制。 1.2 实验装置与方法 1.2.1 实验装置 光合细菌菌种培养、生长倍增周期测定实验均在光 照等条件可调的人工气候箱中进行。菌种连续培养实验 装置如图 1 所示。 该装置由 4 个容积为 24 L 的柱状有机玻璃培养罐串 联而成，单罐均采用底部切向旋流进液、顶部切向排液 的方式，保持培养液平推流动；沿培养罐轴线布入一根 塑料光纤，剥去光纤探入罐体内部分的保护层和反射层， 使该段光纤成为侧发光光纤，光纤的另一端接入光源机， 通过光源机调整罐体内部的光照度；通过稳定的环境温 度，保持反应液的温度；由蠕动泵恒流输送液体培养基 和部分循环的菌液（或启动时的恒浊菌种）。第 6 期 师玉忠等：生物质制氢的光合细菌连续培养技术实验研究 219 图 1 光合细菌连续培养实验装置示意图 Fig.1 Illustration of