霍乱弧菌实验室检测试题.pptVIP

霍乱弧菌的实验室检测 目的:提高检出率,减少漏检以及误判的发生 手段: 检测人员是否有足够的责任心? 检测试剂准备是否齐全且符合要求? 是否严格按照检测流程进行操作? O1群和O139群抗原构造与血清分型 国内商品化的霍乱检测血清 国外血清：日本生研，泰国SA血清等 针对原始样品（如病人粪便）以及初始增菌后的菌液进行快速检测 胶体金快速检测卡 ?O1群霍乱胶体金标记快诊卡 ?O139群霍乱胶体金标记快诊卡 荧光PCR快速检测试剂盒 ?O1群、 O139群双色荧光检测试剂盒 ?霍乱CTX毒力基因荧光检测试剂盒 注：快速检测并不能替代常规检测的进行，只是作为辅助检测的一种手段 O1群和O139群霍乱弧菌的检验程序 检测工作中应关注的事项 生物安全与个人防护（生物安全2级实验室操作，做好个人防护，整个培养流程产生的实验培养废弃物和均应进行高压灭菌消毒） 培养基的配备与质量控制（是否新鲜，含量、PH值、保存条件是否达标，分离平板、血清、生化鉴定等检测试剂质量是否满足要求，是否在有效期内使用等） 可疑阳性结果的及时规范上送（当出现可疑阳性菌株时，要第一时间进行分纯并进一步对分纯物进行血清学确认，应上送分纯后的培养物而不是初始平板！！） 做好样品的相关登记记录。 * * 什么是霍乱? 霍乱是由01群和0139群霍乱弧菌（V．cholerae）引起的急性肠道传染病，发病急、传播速度快、波及范围广、危害严重的甲类传染病。 霍乱概述 古典生物型 小川型 Ogawa (AB) O1群 稻叶型 Inaba (AC) 埃尔托生物型 彦岛型 Hikojim (ABC) 霍乱弧菌 霍乱病原菌 O139群（Bengal） 非O1群 O2-O200群 腹泻病原菌 病原体 O1群，O139群霍乱弧菌 发病特征： 剧烈腹泻、呕吐、严重脱水时致酸中毒、循环衰竭而致死亡 不治疗或医疗很差的条件下病死率可达到20－50％（重症病人达70－100％） 培养特性： 营养要求不高，兼性厌氧，37℃生长，怕酸嗜碱， pH:7.4-9.6快速生长 检验依据： WS 289-2008 《霍乱诊断标准》 霍乱防治手册（1999年第五版） 霍乱的实验室检测 样品的采集和运输 不同样品的病原分离流程及技术要点 ?粪便 ?水体 ?水产品，食品等 平板分离及可疑菌落挑取 菌落鉴定 常用快速检测方法 ?胶体金检测条 ?荧光PCR检测 检测工作中应关注的事项 样品的采集和运输 采集： ?病例：粪便、肛拭子、呕吐物 未使用抗生素之前 “健康”人：粪便、肛拭子 其他传播环节的标本：食物、水、环境类样品…… ?监测：水样，水产品等 运输： 一般要求在3小时内室温（20-25 ℃ ）条件下送达实验室检测 ? C-B运输培养基（pH8.4）; （或文腊二氏保存液） ? 碱性蛋白胨水（pH8.4-9.2） ：不是最佳的，尤其6小时内还不能进行培养时，尽量采用 C-B运输培养基。 粪便的采集与保存运送 以采集病人自然排除的新鲜粪便为主，水样便采取1～3mL，成形便采取指甲大小的粪量，亦可用直肠棉拭或采便管由肛门插入直肠内3～5cm处采取，采集后的样品应尽快挑取接种于碱性蛋白胨水（ＰＨ8.６-9.2），同时划线分离选择性培养基（庆大／四号／ＴＣ