细胞培养技术--刘亮研讨.pptxVIP

细胞培养简介 什么是细胞培养？ 细胞培养是指从动物或植物中取出细胞，然后使其在合适的人工环境中生长。这些细胞可于培养前直接从组织中取出并采用酶或机械方法进行解离，或者也可来自已经建立的细胞系或细胞株。 原代培养 原代培养是指将细胞从组织中分离后，使其在合适的条件下增殖直到占据所有可用基质(即：达到汇合状态) 的培养阶段。在此阶段，必须将细胞转移到新的容器中并更换新鲜培养基，从而对细胞进行传代培养，为其提供更多继续生长的空间。 细胞系 首次传代培养后，原代培养物即被称为细胞系或者亚克隆。来自于原代培养的细胞系寿命有限 (即：有限细胞系)，随着细胞的传代，生长能力最强的细胞会占据优势，最终导致细胞群体在基因型和表型上达到一定程度的均一性。 细胞株 如果将细胞系的一个亚群通过克隆或者其他方法从培养物中明确地选择出来，则此细胞系就成为一个细胞株。与亲代细胞系起始时相比，细胞株往往会获得其他一些遗传学改变。 细胞培养简介 有限细胞系 与连续细胞系 培养条件 冻存 正常细胞通常只能分裂有限的次数，随后就会丧失增殖的能力，这是一个由遗传决定的事件，被称为衰老；这种细胞系被称为有限细胞系。但是，一些细胞系会通过被称为转化的过程变为永生性细胞系，这一过程可自然发生，也可经化学或病毒诱导发生。有限细胞系发生转化获得无限分裂能力后，就成为连续细胞系。 各种细胞的培养条件相差很大，但是细胞培养的人工环境必须包括合适的容器，容器中含有一定的基质或介质，为细胞提供必需的营养素 (氨基酸、碳水化合物、维生素、矿物质)、生长因子、激素和气体 (O2、CO2)，并可调节其物理化学环境 (pH、渗透压、温度)。 大多数细胞均具有贴壁依赖性，必须贴附在固体或半固体基质上培养 (贴壁或者单层培养)，而另一些细胞则可在培养基中漂浮生长 (悬浮培养)。 如果传代时有多余的细胞，可通过适当的保护剂 (例如：DMSO 或甘油) 处理细胞，储存在 –130°C 以下的温度下 (冻存)，直到需要使用之时。 细胞培养简介 培养细胞的形态 根据形状和外观（即：形态）可将培养的细胞分为三大类 成纤维细胞为双极或多极细胞，呈细长形，贴附在基质上生长。 上皮样细胞呈多角形，尺寸更为规则，贴附在基质上呈散在斑片状生长。 淋巴母细胞样细胞呈球形，通常悬浮生长，不贴附在基质表面 细胞培养实验室安全 除了大多数日常工作场所共有的一些安全风险例如电击和火灾之外，细胞培养实验室由于要操作和处理人或动物细胞和组织以及一些有毒、有腐蚀性或者有致突变性的溶剂和试剂，因而还具有一些特殊的危险。其中，最常见的一些危险包括：注射器针头或者其他污染锐器刺伤、液体泼溅到皮肤和粘膜上、经口吞入毒物以及吸入感染性气体挥发。 任何生物安全程序的基本目的都是为了减少或避免实验室工作人员和外部环境与潜在危害性生物物质的接触。细胞培养实验室中最重要的安全要素是严格遵守标准微生物学准则和技术。 美国生物安全性法规和建议包含在由美国疾病预防控制中心 (CDC) 和国立卫生研究院(NIH) 制定、美国卫生和福利部颁布的《微生物和生物医学实验室生物安全》文件中。该文件规定了四个逐级升高的控制等级，依次称为生物安全 1 级至 4 级，介绍了按照操作某一制剂时对应的危险等级应遵守的微生物学准则、应使用的安全设备以及应采取的设施安全措施。 生物安全 1 级 (BSL-1) BSL-1 为适合大多数研究和临床实验室的基础防护等级，适用于不会导致健康正常人发生疾病的物质。 生物安全 2 级 (BSL-2) BSL-2 适用于经口吞入或者经皮肤、粘膜接触会导致人发生不同严重程度疾病的中度危险性物质。大多数细胞培养实验室至少应达到 BSL-2 等级，但是确切要求取决于所用细胞系以及开展的工作类型。 生物安全 3 级 (BSL-3) BSL-3 适用于已知可能会通过气体挥发传播的本地或外来性物质以及可导致严重、甚至致命感染的物质。 生物安全 4 级 (BSL-4) BSL-4 适用于具有高度个体风险、可通过感染性气体挥发导致威胁生命的不治之症的外来性物质。应将此类物质控制在高防范等级的实验室内。 生物安全性等级 安全数据表 (SDS)，又被称为材料安全数据表 (MSDS)，是一种包含某物质各种属性信息的表格。SDS 中包括诸如熔点、沸点和闪点等物理数据、有关该物质毒性、反应性、健康影响、储存和处置的信息，以及应对泼溅的推荐防护设备和措施。 细胞培养实验室的安全设备包括初级屏障，例如：生物安全柜、密闭容器及其他用于消除或尽量减少危险品接触的工程控制设备，以及常与初级屏障配合使用的个人防护设备(PPE)。生物安全柜 (即：细胞培养通风橱) 是最重要的安全设备，可以限制多种微生物学操作产生的感染性泼溅或气体挥发，并可防止您培养