波形蛋白介导猪繁殖呼吸综合征病毒感染.docxVIP

波形蛋白介导猪繁殖与呼吸综合征病毒感染 Ｍａｒｃ－１４５细胞作用的初步研究 摘要：为了研究波形蛋白在介导ＰＲＲＳＶ感染过程中的作用，根据ＧｅｎＢａｎｋ中已发表的波形蛋白序列，设计特异性引物，利用ＲＴ－ＰＣＲ方法从Ｍａｒｃ－１４５细胞中扩增目的基因，克隆入ｐＥＴ－２８ａ，转化表达菌ＢＬ２１（ＤＥ３）中进行诱导表达，用ＳＤＳ－ＰＡＧＥ和Ｗｅｓｔｅｒｎ　ｂｌｏｔ鉴定表达产物，将表达产物纯化后免疫ＢＡＬＢ／ｃ小鼠制备血清，用病毒阻断实验验证ＰＲＲＳＶ与波形蛋白及其抗体的关系。用ＥＬＩＳＡ方法确定了重组波形蛋白与ＰＲＲＳＶ结构蛋白Ｎ蛋白和囊膜蛋白ＧＰ５蛋白之间的关系。结果表明，成功的从Ｍａｒｃ－１４５细胞中扩增出全长的波形蛋白基因，将其克隆入ｐＥＴ－２８ａ，诱导后得到高效表达，表达蛋白纯化后免疫小鼠抗体效价达到１０５，病毒阻断实验表明波形蛋白能部分阻断ＰＲＲＳＶ感染，其抗血清能完全阻断ＰＲＲＳＶ感染。ＥＬＩＳＡ结果表明波形蛋白能与Ｎ蛋白结合而不与ＧＰ５蛋白结合。此结果为ＰＲＲＳＶ感染的细胞的受体机制增添了新的内容，为ＰＲＲＳＶ感染过程中受体间的相互作用关系研究奠定基础。 关键词：猪繁殖与呼吸综合征病毒；波形蛋白；表达；病毒阻断；Ｎ蛋白 猪繁殖与呼吸综合征（Ｐｏｒｃｉｎｅ　ｒｅｐｒｏｄｕｃｔｉｖｅ ａｎｄ　ｒｅｓｐｉｒａｔｏｙ　ｓｙｎｄｒｏｍｅ，ＰＲＲＳ）是由ＰＲＲＳ病毒（ＰＲＲＳＶ）感