荧光定量PCR的原理及其应用教程方案.pptVIP

荧光定量PCR的原理及其应用 分子生物学实验技术 大纲 一.原理概述 二.操作及结果分析 (一).样品制备 (二).引物及探针的设计与合成 (三).标准品的制备---质粒或纯化后的PCR产物 (四).通道的选择及增益的选择 (五).标准曲线的建立 (六).加样时应注意的细节 (七).阈值的选定 (八).熔解曲线分析 (九).操作流程 三.应用 (一).绝对定量分析 (二).相对定量分析及实验方案 (三).SNP检测分析 一、原理概述 1.Real-Time PCR 概论 实时荧光定量PCR技术于1996年由美国Applied Biosystems公司推出，由于该技术不仅实现了PCR从定性到定量的飞跃，而且与常规PCR相比，它具有特异性更强、有效解决PCR污染问题、自动化程度高等特点，目前已得到广泛应用。 实时荧光定量PCR：在PCR反应体系中加入荧光基团，利用荧光信号积累实时监测整 个PCR进程，最后通过标准曲线对未知模板进行定量分析的方 法。 定量PCR仪是在普通PCR仪的基础上加装了荧光激发装置和荧光检测装置，PC