实时定量PCR技术原理及应用课件new10.ppt

聚合酶链式反应技术及其应用 提 纲 第一节 聚合酶链式反应扩增原理 第二节 PCR反应体系和循环参数的优化 第三节 PCR反应的问题与对策 第四节 一个常规PCR实验的设计 第五节 聚合酶链式反应技术类型 第六节 聚合酶链式反应技术应用 聚合酶链反应 (Polymerase Chain Reaction ,PCR) 聚合酶链反应(polymerase chain reaction，PCR)是近十几年来发展和普及最迅速的分子生物学新技术之一。由于它具有强大的扩增能力，并且可与其他分子生物学方法(如核酸杂交)和免疫学方法(如ELISA)相结合应用，使其敏感性和特异性都大大增强，因而广泛地应用于生物医学领域的各个学科，包括基因的克隆、修饰、改建、构建cDNA文库，遗传病，传染病的诊断，法医学鉴定，物种起源，生物进化分析，流行病学调查，等等。由于PCR对世界生物医学研究的巨大推动作用，其发明者Mullis因而获得1992年诺贝尔医学奖。 最早报道的PCR是用大肠杆菌DNA聚合酶Ⅰ 经枯草杆菌蛋白酶处理后获得的Klenow片段来 催化DNA链的延伸。由于加热变性时酶会失活， 需要补加一份酶催化下一轮合成。这样不仅操 作复杂,而且由于酶反应的温度较低，DNA分子 会产生二级结构或引物非