实验三醋酸纤维素膜分离血清蛋白质.pptVIP

实验三 醋酸纤维素膜电泳分离血清蛋白质 实验目的 通过本实验使学生掌握电泳的基本原理 学会薄膜电泳的基本操作 掌握血清中不同蛋白质的分离方法 实验原理 蛋白质是两性电解质，其在等电点时呈电中性状态，在电场中既不向负极移动，也不向正极移动。血清中各种蛋白质的等电点多低于pH7.4，因此在pH比其等电点高的缓冲液(pH8.6)中，它们都解离成负离子，在电场中向正极移动。因为各种血清蛋白等电点不同(故而在同样pH值下带电荷数不同)以及分子量不同，因而在电场中的移动速度不同。 蛋白质分子小而带电荷多者，移动速度较快；分子大而带电荷少者泳动速度较慢。 据此原理可利用醋酸纤维薄膜电泳将血清蛋白分为清蛋白、α1-球蛋白、α2-球蛋白、β-球蛋白及γ-球蛋白等5条区带。 这些血清蛋白分离后，用蛋白染色剂进行染色。由于蛋白质的量与结合的染料量基本成正比，故可分别将5条区带剪开，使染料溶解于碱性溶液中，用比色法测定，并计算出5种蛋白质的相对百分数。也可将染色后的薄膜经透明处理，直接用光密度扫描仪测定。 该方法是将少量新鲜血清用点样器点在浸有缓冲液的乙酸纤维素薄膜上，薄膜两端经过滤纸与电泳槽中缓冲液相连，所用缓冲液pH值为8.6，血清蛋白质在此缓冲液中均带负电荷，在电场中向正极泳动。 电泳后，将薄膜取出，经染色和漂洗，薄膜上显示出五条蓝色区带，每条带代表一种蛋白质，按泳动快慢顺序，各区带分别为清