盐酸萘乙二胺分光光法测定肉制品中的亚硝酸盐.docxVIP

盐酸萘乙二胺分光光度法测定肉制品中的亚硝酸盐 姓名： 班级：食品科学 学号： 一 目的要求 1 通过实验强化对紫外—可见分光光度法定量分析原理的理解； 2 了解以紫外—可见分光光度法为基础的检测方法的建立思路； 3 直观了解紫外—可见分光光度计的结构； 4 掌握紫外－可见吸收光谱的测定方法； 5 掌握利用标准曲线法进行定量分析的方法。 二 实验原理 亚硝酸盐在食品生产中用作发色剂和防腐剂，允许用于肉及肉制品的生产加工中，使得肉与肉制品呈现良好的色泽。其呈色机理是，亚硝酸盐与肌肉中的乳酸作用产生亚硝酸，而亚硝酸不稳定易分解产生一氧化氮，然后一氧化氮与肌红蛋白结合产生红色的亚硝基肌红蛋白，使肉制品产生稳定的红色。但是过量的亚硝酸盐能够引起高铁血红蛋白症， 导致组织缺氧，还可使血管扩张、血压降低。 在酸性条件下，亚硝酸盐可与对氨基苯磺酸通过重氮化反应定量生成重氮盐，该重氮盐可进一步与盐酸萘乙二胺通过偶联反应生成紫红色偶氮染料，在特定波长处产生较强吸收： ； 通过测定该偶氮染料在特定波长下的吸光度，利用朗伯-比尔定律（A=KLc）可确定样品中亚硝酸盐的质量浓度。 采用标准曲线法进行定量分析时，可对亚硝酸盐标准溶液系列进行上述反应，通过测定该系列的吸光度，利用excel回归标准曲线，得到浓度和吸光度的关系，再将样品中亚硝酸盐测得的吸光值带到方程中算出其中亚硝酸盐的浓度。 三 仪器与试剂 1 仪器 Cary Eclipse型紫外-可见分光光度计；BS 124S电子分析天平。 2 试剂 亚铁氰化钾[K4Fe(CN)6·3H2O]、乙酸锌[Zn(CH3COO)2·2H2O]、硼砂 [Na2B4O7·10H2O]、对氨基苯磺酸、盐酸萘乙二胺，均为分析纯试剂。 四 实验步骤 1 试剂配制 亚铁氰化钾溶液：称取106.0 g 亚铁氰化钾，溶解于水后稀释至1000mL。 乙酸锌溶液：称取220.0 g 乙酸锌，加30 mL冰乙酸溶于水，稀释至1000mL。 饱和硼砂溶液：称取5.0 g 硼砂，溶解于100 mL热水中，冷却后备用。 对氨基苯磺酸溶液：称取0.4 g 对氨基苯磺酸，溶解于100 mL 20%的盐酸中，置棕色瓶中摇匀，避光保存，其浓度为4 g/L。 盐酸萘乙二胺溶液：称取0.2 g 盐酸萘乙二胺，溶解于100 mL水中,，混匀后置棕色瓶中，避光保存，其浓度为2 g/L。 亚硝酸钠标准储备溶液：精密称取0.1000 g 已于硅胶干燥器中干燥24 h的亚硝酸钠，用蒸馏水溶解移入500 mL容量瓶中，稀释至刻度，混匀。此溶液亚硝酸钠含量为200 μg/mL。 亚硝酸钠标准使用液：临用前吸取亚硝酸钠标准储备溶液5.00 mL置于100 mL容量瓶中，加水稀释至刻度，此溶液亚硝酸钠含量为10.0 μg/mL。 2 标准溶液系列和样品制备 标准溶液系列制备：吸取亚硝酸钠标准使用液0、2.5、5、10、15、20、25 mL于50 mL具塞比色管中，分别加入2 mL对氨基苯磺酸溶液，混匀后静置3～5 min，再分别加入1 mL盐酸萘乙二胺溶液，加水至刻度，混匀静置15 min后测定，制成的标准溶液浓度系列为0、0.5、1、2、3、4、5μg/mL。 样品制备：称取5.0 g 经绞碎混匀的样品，将其置于50mL烧杯中，加入12.5 mL硼砂饱和溶液，搅拌均匀，用约300 mL 70℃左右的水将样品转移入500 mL容量瓶中，置沸水浴中加热15min后，取出冷却至室温，然后边转动边加入5 mL亚铁氰化钾溶液，摇匀后再加入5 mL乙酸锌溶液以沉淀蛋白质，加水至刻度，混匀（0.01g/ml），放置0.5 h，除去上层脂肪后将清液用滤纸过滤，弃去初滤液约30 mL，收集滤液备用。吸取40 mL滤液于50 mL具塞比色管中，加入2 mL对氨基苯磺酸溶液，混匀后静置3～5 min，再加入1 mL盐酸萘乙二胺溶液，加水至刻度，混匀静置15 min后测定(0.008g/ml)。 3 测定 用1 cm吸收池，对显色后的标准溶液系列最高浓度的溶液进行300-700nm范围内紫外—可见吸收光谱扫描，并从该光谱中确定最大吸收峰的波长。 用1 cm吸收池，以空白调节零点，于特定波长下测定标准溶液系列的吸光度峰值，每个标准溶液重复测定3次，记录吸光度数据；用同样条件测定样品溶液的吸光度，每个样品重复3次，记录样品吸光度数据。 4实验结束后，按要求关好仪器。 五 结果处理（见后面） 1 对记录的标准溶液系列中的每一个标准溶液的3次吸光度求平均值，对该系列的吸光度平均值和浓度值进行线性回归，获得标准曲线方程A=a+bC中的a和b。该项工作亦可利用仪器的功能在仪器上完成。 2 对测定的样品溶液的3次吸光度求平均值，将该值代入A=a+bC中，得到样