3、第三章、蛋白质化学解说.ppt

第三章 蛋白质化学 学习要求：1. 了解蛋白质生物功能、分类。2. 了解氨基酸分类、结构，掌握其重要化学反  应和分离、分析方法，重点弄清楚它的两性 性质,pI和 Pk。3. 掌握蛋白质的一级结构及其序列分析方法。  掌握蛋白质二、三和四级结构的基本概念。4. 了解蛋白质的重要理化性质。5. 了解蛋白质分离、纯化方法及其理论依据。 一、蛋白质的重要作用 蛋白质作为生命现象的物质基础之一，是构成一切细胞和组织结构的最重要的组成成分，参与生物体内许多方面的重要功能。 四、蛋白质的基本组成单位——氨基酸 2、两性解离与等电点（两性性质）：（1）氨基酸为两性电解质： 4、氨基酸的重要化学性质 氨基参与的反应 羧基参加的反应 α-氨基和α-羧基共同参加的反应 与茚三酮的反应： α-氨基酸与水合茚三酮溶液共热，引起aa氧化脱氨、脱羧，水合茚三酮与反应产物（氨和还原型茚三酮）缩合生成兰紫色化合物（Pro和Hyp呈黄色），色深与溶液中氨基浓度成正比。 成肽反应 一个氨基酸的氨基与另一个氨基酸的羧基可以缩合成肽，形成的键称肽键。 五、氨基酸分离和分析 一种溶质在两种互不相溶或几乎不相溶的溶剂中分配时,在一定温度下平衡后,溶质在 两相溶剂中的浓度比值与其溶解度比值相等,此比值称分配系数. 薄层层析 离子交换层析 高效液相色谱法 电泳分离：带电颗粒在电场中移动。 氨基酸是两性离子化合物，在不同的pH条件下，携带不同的电荷。当把氨基酸混合液点在用一定缓冲液浸湿的滤纸条上的时候，混合液中的各组分能根据它们所带电荷的种类和静电荷的多寡，在电场中以不同的速度向不同方向泳动，从而把它们分开。 带电颗粒在电场中泳动的速度，叫做电泳迁移率 μ=（q/πηγ2）×V 六、蛋白质的结构 5、生物活性肽 2）、二硫键的拆分 二硫键的存在可能使肽链发生“纠缠”，不利于后续的酶切反应和化学上的处理。所以如果在多肽链之间或链内存在二硫键，必须使其断开，以获得伸展的肽链。 常用方法：2-巯基乙醇 3）、氨基酸组成分析 酸水解 碱水解 4）、肽链的部分水解 7）确定二硫键和酰胺键的位置 对角线电泳：把水解后的混合肽段点到滤纸中央， 在PH6.5的条件下，进行第一向电泳，肽段将按其大 小及电荷的不同分离，然后把滤纸暴露在过甲酸蒸 汽中，使二硫键断裂，这时每个含二硫键的肽段被 氧化成一对含磺基丙氨酸的肽。滤纸旋转90度在与第 一向完全相同的条件下进行第二向电泳，此时大多 数肽段的迁移率未变，并位于滤纸的一条对角线 上，而含半胱氨磺酸的成对肽段比原来含二硫键的 肽小且负电荷增加，结果他们都偏离了对角线，进 行氨基酸序列分析，然后与原多肽链的氨基酸序列 比较，即可推断出二硫键的位置。 某蛋白质肽链为10肽，用两种方法进行水解，水解法A得到4个小肽，分别为A1、A2、A3、A4，水解法B得到3个小肽，分别为B1、B2、B3。请确定此肽链的氨基酸顺序 A1 Ala-Phe A2 Gly-Lys-Asn-Tyr A3 Arg-Tyr A4 His-Val B1 Ala-Phe-Gly-Lys B2 Asn-Tyr-Arg B3 Tyr-His-Val Ala-Phe-Gly-Lys-Asn-Tyr-Arg-Tyr-His-Val （2）疏水作用：aa非极性侧链形成。 作用：维持三级结构。 （5）、环形构象 几乎所有大于60个残基的氨基酸都含有一个或几个6-16个残基的环形结构。这种环形结构的形状像Ω，由于Ω几乎总是位于蛋白质的表面，所以它们可能具有一定的信息识别作用。 4、一级结构与生物进化 变构现象 一些小分子物质，作用于具有四级结构的蛋白质，与其活性中心外的部位结合，因其亚基间的次级键的改变，使蛋白质构象发生轻微变化，如分子变得较疏松和较紧密，使其生物活性升高或降低的过程。 2、两性电离与等电点 蛋白质和多肽一样，能够发生两性解离，具等电点。在等电点 (Isoelectric point PI)时，溶解度最小，在电场中不移动。 在等电点偏酸性溶液中，蛋白质粒子带正电荷，在电场中向负极移动；在等电点偏碱性溶液中，蛋白质粒子带负电荷，在电场中向正极移动。这种现象称为蛋白质电泳。 3、胶体性质 5、蛋白质的沉淀反应 蛋白质在溶液中靠水膜和电荷保持其稳定性，水膜和电荷一旦除去，蛋白质溶液的稳定性就被破坏