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第六章 微生物菌种的选育 第一节 从自然界中分离筛选菌种 1、生产菌株来源 索取或购买 自己选育 用原有菌株进行遗传改造进行育种 向菌种保藏机构索取、购买出发菌株进行选 从自然界中分离菌种 从自然界中分离菌种就是从自然界微生物资源中有目的、快速、准确地选出所需要的菌种。 从自然界中分离筛选菌种的一般步骤 设计方案→采样→增殖培养*→平板分离 →筛选(初筛、复筛)→单株纯种分离 →性能考察(生产性能试验、毒性试验、菌种鉴定） 2 .采样方法 （1） 去除表层土 （2） 取5-15cm土样几十克，装入无菌牛皮低袋或逆料袋中 3. 注意 记录：时间，地点，环境情况等 防止水样品袋应封好口，分失去 土样应在分离前破碎 尽快分离 二. 增殖培养（富集培养） 适用：样品中目的菌数量不够多时 目的：提高样品中目的菌的数量和比例 原理：通过控制营养成分或培养条件，使目的菌得以繁殖和/或非目的菌的生长受到抑制 1、增殖培养的 方法 控制营养成分 控制培养基pH 控制培养温度 热处理——增殖芽孢细菌 添加抑制剂 三. 纯种分离 目的：将目的菌从混杂的微生物中分离出来，获得纯培养 1. 纯种分离的一般方法 （1）稀释平板法 倾注平板或涂布平板 （2）划线法 （3）组织分离法* 适用于分离高等真菌及植物病原菌 2、平皿反应快速检出法——定性或半定量 纸片培养显色法 透明圈法 变色圈法 生长圈法 抑制圈 3、厌氧性微生物的分离法 （1）去除培养基中的溶解氧，降低Eh （2）创造无氧环境 物理除氧 空气置换法：干燥器或厌氧培养罐 化学除氧 H2 + O2 → H2O (钯作催化剂） GASPAK罐除氧：硼氢化钠、柠檬酸，碳酸氢钠化学反应产生H2 和CO2，H2与O2反应生成水 （3）厌氧分离（培养）技术 高层琼脂柱技术 厌氧罐技术 厌氧手套箱技术 好氧培养 五、培养工艺条件试验与生产试验 1、摇瓶发酵条件 培养基组成、初始pH、通风量（装液量）、接种量、培养温度… 2、小型台式发酵罐发酵工艺条件 溶解氧控制，pH值控制，原料添加模式，消泡剂… 第二节 基因突变 突变（Mutation）定义：遗传物质核酸（DNA或病毒中的RNA）的分子结构或数量突然发生了可遗传的变化。 突变是一种遗传的状态，是基因由于结构发生改变从而由原来的存在状态变为另一种存在状态，即它的等位基因。 突变体：带有突变基因的细胞或个体 突变型：突变体的基因型或表型称为突变型，和其相对的原存在状态称为野生型。 一、 突变类型 按变化范围分突变类型 (一)染色体畸变（chromosome aberration)染色体数目的变化或染色体结构发生较大片段的异常改变。 1、染色体数目的变化 整倍体(euploidy)：含有完整的染色体组 单倍体：haploid 二倍体：diploid 三倍体：triploid 四倍体：tetraploid 非整倍体 aneuploidy：含有不完整状态的染色体组，一般是指二倍体中成对染色体成员的增加或减少。 单体（二倍减一，monosomic diploid): 2n-1 缺体（二倍减二，nullisomic dilpoid): 2n-2 三体（二倍加一，trisomic diploid): 2n+1 四体（二倍加二，tetrasomic diploid): 2n+2 双二倍加一（double trisomic）: 2n+1+ 1 部分二倍体（merodiploid）：细菌等原核生物中由一整条染色体和外来的一个染色体片段所构成的不完整二倍体。 2、染色体结构的变化 缺失 deletion： 重复 duplication ： 倒位 inversion： 易位 translocation ： (二) 基因突变（gene mutation） ----染色体局部座位内的变化 点突变：只涉及DNA分子中一对或少数几对碱基的改变。突变发生在一个基因范围内。 多位点突变：突变超出一个基因范围。 1、碱基置换 base replacement DNA链上的某一碱基对为另一碱基对所取代。 转换 transition ： 颠换 transversion： (3) 遗传学效应 错义突变 missense mutation： 同义突变 silent mutation： 无义突变 nonsense mutation： 2、移码突变 frameshift mutation：由于一对或少数